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질문 DMEM, RPMI powder media 녹인 후 autoclave에 대한 질문입니다.
코페아  | 2014.04.04 17:26
답변있는 질문은 수정/삭제 불가(☞문의)
안녕하세요 ?

powder media 녹인 후에 autoclave 하는 것 좀 질문드리고자 합니다.

저희가 gibco에서 L-glutamine 포함된 DMEM 이나 RPMI powder를 녹여서 media를 만들어 쓰고있습니다.

media 녹인 후 bicarbonate 첨가하고 Ph 맞춘 후 filtering 후 사용하고 있습니다.



그런데 최근에 bacteria에 의한 컨탐이 계속 발생하여

부득이하게 새로 만들어서 autoclave를 해야 하였습니다.

그래서 위의 과정 후에 autoclave를 하여 media를 살펴보니

흰색의 침전물이 생겨있었습니다.

질문은 다음과 같습니다.

1. media autoclave 해도 괜찮은가요? 대부분 필터링 하시는건 알고 있는데

오토클레이브 하면 L-glutamine, bicarbonate 변화하는것 말고 다른 이유가 있나요 ? 
만약 위의 문제라면 오토클레이브하고 넣어주려고 하고 있습니다.

2. 오토클레이브 후 침전물은 무엇인지 알 수 있을까요?
별 문제가 없으면 사용해도 되는데 위와같은 것이 혹시 문제가 될지 궁금합니다.


질문에 부족한 점이 있으면 말씀해주시고 

항상 좋은 실험결과와 좋은 논문 나오시길 빌겠습니다. 

#media
 
#autoclave
 
#DMEM RPMI
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
올챙이결바다  |  2014.04.04   

저희방은 DMEM은 사서쓰고
RPMI는 만들어쓰는데요

첨에 만들때 멸균시킨 증류수를 사용합니다.
(pure water로 만들면 가장 좋지만 비싸니깐)

그래서 멸균 증류수에 나머지 시약들 넣고 녹인후
pH 맞춘 후 filter후 사용합니다.

이렇게 해보시면 좋을듯해요

개구리오크남  |  2014.04.05   

만든 미디어를 오토클레이브 돌렸다고요????? 미디어를 왜 오토클레이브 해요?? glutamine, sodium bicarbonate 조성 바뀌는 게 아무렇지 않게 생각되시나요??;;;
contam된 media는 그냥 버리시고, autoclave된 dw에 녹여 pH맞추고 벤치안에서 필터링해서 잘 패킹해서 쓰는데, 만드는 과정에서 contam된 적은 없었어요.
미디어 쓰는 과정 중에 contam될 확률이 더 크다고 생각되네요;;

대왕개구리엘피스  |  2014.04.05   

최악의 수를 두신 듯 합니다.
Media에는 고온고압에서 침전을 생성하는 물질들이 여럿 들어 있습니다.

배지의 오염이 문제라면 powder가 아니라 당분간 문제가 해결될 때까지 liquid media를 구입해 사용하는 것이 어떨까합니다.

코페아  |  2014.04.05    
답변들 감사합니다.
결바다님 // 저희도 처음 만들때는 당연히 autoclave 시킨 증류수 사용하였습니다 ^^ 
제 생각에는 filter를 3번정도 재사용했는데 그것 문제 인듯합니다. 
답변감사합니다
오크남님 //
gulutamine , sodium bicarbonate는 조성에 맞게 추가했습니다. 
위에도 그에 대해 언급하였습니다.
아무렇지 않게 생각하지는 않았습니다. 제가 글을 그렇게 적었는거 같진 않은데...
당연히 중요하게 생각합니다. 
저도 쓰는 과정중이나 filter의 재사용 때문인거같습니다 
답변감사합니다.
엘피스님//
아마 phosphate류 인거같은데... 다른 media powder에서도 phosphate들이 있는데도 
오토클레이브 가능하다는 말이 있어서 급한 마음에 하였습니다.
저도 그러고 싶은데... 
답변 정말 감사합니다 엘피스님 (__)







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