[DEBUG-WINDOW 처리영역 보기]
즐겨찾기  |  뉴스레터  |  오늘의 정보 회원가입   로그인
BRIC홈 실험
퍼킨엘머
배너광고안내
이전
다음
스폰서배너광고 안내  배너1 배너2 배너3 배너4
BioLab 김한준 교수
전체보기 실험 Q&A 안전점검 LABox
 전체 > Molecular Biology-DNA > PCR/RT-PCR/Q-PCR
조회 4210  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 qPCR에 관해 여주어봅니다.
개구리캐틀  | 2014.06.23 14:23
qPCR 조건에 대해 몇가지 고수님게 여쭈어 봅니다.

얼마전 qPCR primer, probe를 제작하였는데... primer랑 probe의 Tm 값이 많이 차이가 납니다.

primer의 Tm값은 F/R 모두 66.5도로 디자인 하였으나, probe는 77.7도 로 디자인 되었습니다.

이에 qPCR 시행시 온도를 어디에 기준을 두고 맟춰야 하나요????

66도로 맞추자니 probe가 binding 하지 않을것 같고, probe에 맟춰 실험하지나 primer쪽이 걸리네요...

이럴경우 고수님들은 어디에 기준을 두고 조건을 잡으시나요???

한가지 더 여주어보면, qPCR전에 qPCR primer로 conventional PCR을 시행하고 PCR 산물을 이용하여 qPCR의 template로 하고 primer 없이 probe만 넣고 실험을 진행 한다면 예상 되느 ㄴ결과는 어떤것 일까요??? signal 확인이 가능할 까요?? 예상으론 약 200bp정도의 PCR산물이 주형이 되니 specific probe만 넣고 (primer 없이) 실험한다면 signal을 확인 할 수 있지 않을까 하는데... 고수님의 의견은 어떠신지요???

혹, taq polymerase를 일반적으로 쓰는 polymerase가 아니라 다른 특수한 polymerase가 필요하진 않을 까요???
#QPCR
 
#probe
 
#Taq polymerase
 답변하기
답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리엘피스  |  2014.06.24   
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

여러개의 primer를 쓰는 경우, 가장 낮은 Tm값을 가지는 primer를 기준으로 해야 합니다.
66C에서는 probe를 포함한 모든 primer가 붙지만 70C를 넘어가게 되면 probe만 붙습니다.

Taqman방식의 qPCR은 Taq pol의 3' to 5' exonuclease에 의해 probe가 깨지면서 나오는 형광의 쎄기를 측정하는 방식입니다. probe만 넣고는 signal의 변화를 볼 수 없습니다.
개구리캐틀  |  2014.06.26   

엘피스님
그럼 FAM으로 라벨링한 probe만 넣고 실험을 디자인 할 경우 사용할 수 있는 taq은 없는 건가요??
 아니면, Taqman probe가 아닌 Hybridization probe로 새롭게 디자인 하여야 하는건가요??
답변하기
할인행사/신제품신기술 광고 검색광고
그린메이트바이오텍 그린메이트바이오텍
[TECAN한국공인대리점] TECAN 자동화장비 봄맞이 상담 이벤트!! (6.9까지)
필코리아테크놀로지 필코리아테크놀로지
Plasmid DNA를 빠르고 안정적으로 추출 가능한 Monarch® Plasmid Miniprep Kit.. (12.31까지)
인성크로마텍 인성크로마텍
[Kd & Conc.] 항원/항체 고정 및 정제 과정 없이 결합 친화도(Kd) 및 농도(Conc.)를 동시에..
인성크로마텍 인성크로마텍
[다중 면역형광 이미징 시스템] ORION™ 한번의 면역염색 및 스캔으로 20 여 개의 바이오마커 동시 분석
바이오닉스 바이오닉스
[TECAN No.1 한국공식대리점] TECAN 대행사! 견적 및 Demo 신청시 상품권 지급 (7.2까지)
크라이오젠 크라이오젠
Cryo Label Printing System (지금 구매시 -196℃ LN2 Label 500장 무상지급.. (12.30까지)
최근등록   더보기 >
ELISA 실험 과정에 대해서   05.31
CFX96 사용법 및 결과 분석 방법...   05.30
4 곱하기 10의 5승의 cell pellet 제조   05.30
NaCl 첨가 Mueller-Hinton Broth 제조 시 결정이 생기는 문제   05.30
OCT fat tissue cutting   05.30
웨스턴 밴드가 너무 얇습니다   05.30
Real time PCR calibration이 안됐다고 결과 차이가 없을 수 있나요?   05.30
동결건조 관련 질문이 있습니다!! (2차건조 해야하나요?)   05.30
PCR 전기영동 밴드 해석 질문있습니다.   05.30
Phospho-NF-κB p65에 대해 질문이 있습니다   05.30
최근답변자 우수답변자
개구리CBD 김선..

올챙이밍고

개구리SCIENTIST0..

알가치있는같이

개구리푸른고래

올챙이브르르르릭

알달성

대왕개구리SPEED
대왕개구리안재진

꽃개구리Applied_Mi..

꽃개구리Kozmoj

개구리Kim

개구리secu

개구리하늘을달려라

개구리절대교주

개구리모리모리
실험관련연재
세오 연재중실전 실험 프로토콜 101
세오 (필명) (Cincinnati Children’s Hospital Medical Center)
신코 연재중분석장비 이야기
분석장비 탐험가 (필명) ((주)신코)
곽민준 연재중랩노트
곽민준 (POSTECH 생명과학과)
박은총 연재마감후배에게 주고 싶은 면역학 노트
박은총(Duke University)
Mr.S 연재마감의학계의 Spectaculum: 임상시험
Mr. S (필명) (연세대학교)
에스프리 연재마감실험을 해봅시다
에스프리 (필명)
이제욱 연재마감생명과학자 기초체력 다지기
이제욱 (오송첨단의료산업진흥재단, 신약개발지원센터)
위로가기
실험 홈  |  실험FAQ
홈  |  BRIC소개  |  이용안내  |  이용약관  |  개인정보처리방침  |  이메일무단수집거부
Copyright © BRIC. All rights reserved.  |  문의		 트위터 트위터    페이스북 페이스북   유튜브 유튜브    RSS서비스 RSS
ACROBIOSYSTEMS 광고