실험 Q&A Mol. Biol.-Protein > Pull-down Assays
IP 할때, sample buffer에 beta-ME 유무
학생 (비회원)
제가 지금 CO-IP를 진행하고 있는데요..
궁금한 점이 있어 질문 올리게 되었습니다.
Interaction을 보고자 하는 단백질 A와 B의 크기가 각각 50Kb, 20Kb정도 되는데요..
문제는 단백질 A의 크기가 heavy chain 사이즈와 겹쳐 정확한 사이즈를 확인할 수 없다는 겁니다..
그 정도 크기는 gel 상에서 넓게 벌리는게 불가능하다보니.. ㅠㅠ
방법을 찾아보니까,
light-specific antibody를 사용하거나
western시, sample buffer에 beta-ME를 빼고 끓이면 HC와 LC가 떨어지지 않아서 150~200Kb(?)부근에 밴드 하나만 나타난다고 하더라구요.
지금당장 항체를 구입할 수는 없을 것 같아 두번째 방법을 사용해보고 싶은데요..
혹시 해보신분들 계신가요?
test를 해보고싶긴한데.. 그냥 cell lysate에 IP에 사용하는 항체 넣어주고 gel 걸어서
western에 사용하는 항체로 detection 해보면 될지.. ^^;;;;;;;
다른 방법이 있다면 조언 부탁드립니다.. ㅠㅠ
Bio마켓 프리미엄