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 전체 > Immunology > Immunocytochemistry
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질문 cell line 으로 immunohistochemistry 질문
궁금이  | 2014.08.05 07:46
답변있는 질문은 수정/삭제 불가(☞문의)
안녕하세요`
저는 cell line으로 immunohistochemistry 를 하기위해
6well plate에 cover slide 위에 세포를 키우고
cell fixation 과정을
- washing with PBS
- 10 min with 10% formalin in PBS (Keep wet)
- 5 min with cold methanol, allow to air dry
- 5 min with cold acetone, allow to air dry
이 과정을 거칩니다.

질문 1. cover slide 가 유리이다보니 cold acetone에 넣으면 유리가 dish바닥에 뭍어서 깨지는 경우가 많습니다. 이 과정을 잘 할수 있는 방법이 없나요?

질문 2. 안깨진 cover slide를 immunohistochemistry 하고 난 뒤에 맨 마지막 단계인
dehydrate step인 95 % EHOH for 2 min, 100 % ETOH for 2 min하고
clear in Xylene을 하고 나면 또 cover slide가 바닥에 붙어서 깨집니다.
어떻게해야 잘 할수 있나요??

도와주세요.
#immunohistochemistry
 
#cell
 
#cover glass
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
개구리하늘을달려라  |  2014.08.05   

immunocytochemistry를 하시는가 봅니다.
저는 ICC경우 fluorescence만 확인해봤지만...
dehydration 과정등이 필요한가요?

어쨋든 필요하다면...
저같은 경우는 1ml 주사기 needle 끝을 구부려서 사용했습니다.
acetone 5min 하신후 석션하지 마시고 시린지니들 구부린거로 조심히 들어서 빼내신후
air dry를 하시는게 좋을듯 싶습니다. 

개구리귤여섯개  |  2014.08.05   

형광으로 보는 것이 아니라 DAB발색을 통해서 관찰하시려나보군요? 그래서 immunohistochemistry라고 하신 것 같은데 cell을 이용하는 것은 통상 immunocytochemistry라고 합니다.
cover glass가 깨지는 문제를 해결할 수 없다면 cover glass를 사용하지 않으면 될 것 같습니다.
slide glass 위에 12-well 까지 cell을 키울 수 있는 culture용 slide glass가 있습니다. well 에 cell을 키우고 모든 과정을 거친 후 well의 틀을 떼어내고 cover glass로 마운팅 하면 됩니다.
이런 slide glass 찾아보시면 많이 나옵니다. 그리고 이백과학에서 위와 같은 culture용 slide glass 샘플을 보내주고 있습니다. 저도 사용해보려고 받아두었습니다. 샘플 받아서 사용하면서 문제 해결해보는 것도 나쁘지 않을듯합니다.   

김유리  |  2014.08.14    

감사합니다. 귤여섯개님. (주)이백과학 김유리 입니다.
immunohistochemistry 실험을 준비중이시군요.

독일 ibidi 사의 micro-Dish를 소개해 드립니다. 귤여섯개님께서 추천하신 제품은 ibidi 81201 12 well chamber,removable 제품이며,

upload image
그림과같이 바닥은 일반 Slide-Glass 이며 벽면이 실리콘재질로 실험 후 제거가능합니다.

또한 ibidi의 제품들은  일반적으로 사용하시는 N0.1.5 Cover Slip과 동일한 두께의 특수 Plastic 재질의 Dish로, Confocal에도 사용 가능할 만큼 뛰어난 투과율을 보이며 Autofluorescence는 굉장히 낮은 제품입니다.

  upload image        upload image

오른쪽 그림처럼  Cell Seeding - Culture - Wash - 염색 - 고정 - 현미경 관찰까지 한 Dish로 사용 가능하며, well 당 Volume이 30ul로 샘플, Ab, 시약 등을 절약 할 수 있는 micro-Channel 제품도 있습니다.

 

전 제품 모두 샘플신청 가능합니다.

김유리(010-2460-2801)

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