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질문 ELISA 정량을 하려고 합니당.
알실험초보녀  | 2014.09.02 11:15

실험이 처음인데요... rat serum을 가지고 interferon gamma 농도를 구하라구요... ELISA 정량을 하려고 합니다. ELISA kit를 가지고하는데.... standard curve는 protocol 보고 따라할 수는 있는데 당황스러운게... serum인 sample을 가지고 어찌 해야될지 멘붕입니다.
원액으로 하는건지 아니면  희석배율로 하는건지 고수님들 희석배율이라던지 버퍼라든디 조건을 어찌해야될지 알려주세요 ㅠㅠ protocol 봐도 모르겠습니다...

#ELISA
 
#serum
 
#rat
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
올챙이hibernating  |  2014.09.02   


아마 방법이 이렇게 됩니다.
첫번째로 선행연구에서 나온 값을 봅니다.
그 값이 스탠다드 범위안에 있으면 희석하지 않아도 됩니다.
하지만 그 값이 스탠다드 범위 밖에 있다면 희석해서 사용합니다.
여유 샘플이 있다면 희석배율을 각각 다르게 하여 적정 희석량을
구합니다.
ㅇㅇ  |  2014.09.05    
Kit를 이용하시는지 아니면 개별 protocol로 직접 하시는지요?

Kit의 경우는 보통 해당 sample type에 따른 희석버퍼나 희석배율 등 안내가 되어 있습니다.


만약에  개인이 만든 커스텀 protocol로 실험을 하신다면  직접 해보는 방법 밖에는 없습니다.


우선 타 논문을 보고  비슷한 모델(Rat)의  IFNγ   농도를 확인하시고
standard 범위 안에 나올 수 있도록  계산하여  희석하는게 좋습니다.

kit를 이용하더라도  가끔  다른 자극에 의해  높게 나오는 경우가 있기에
저는 모든 샘플을 돌리기전에  컨트롤과 가장높게 나올 것으로 예상되는 샘플을
미리 돌려봅니다.  그리고  overage 되면 희석배율을 다시 정해서 실험하곤 합니다.
시간이 오래 걸리기에  처음 테스트할때 kit의 경우 희석배율이 정해져있지만
권장 희석배율 근처로  0.5X 1X,  5X, 10X 등으로  찍어봅니다..


혹시 kit면  제품번호나  개인 protocol 이라면  준비과정 부분을 올려보세요.
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