[DEBUG-WINDOW 처리영역 보기]
즐겨찾기  |  뉴스레터  |  오늘의 정보 회원가입   로그인
BRIC홈 실험
ACROBIOSYSTEMS
배너광고안내
이전
다음
스폰서배너광고 안내  배너1 배너2 배너3 배너4
웹진 6월호 오픈
전체보기 안전점검 LABox
 전체 > Microbiology > Bacteria
조회 10686  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 세균의 OD측정 후 colony counting -> 표준곡선
주리  | 2014.10.22 16:37
답변있는 질문은 수정/삭제 불가(☞문의)
첨부파일 파일첨부: C.gracilis 표준곡선.xlsx (19 KB)

안녕하세요 도움을 얻고자 질문드립니다.
세균의 OD값을 측정하고 colony를 카운팅해서 표준곡선을 그리는 실험을 진행했는데요

우선 배양하던 균(C.gracilis) 10ml을 1ml의 PBS에 harvest했고 이걸 균 원액이라 했습니다.
원액을 1/10 씩 희석해서 4번까지 튜브에 만들었어요
그리고 각각의 튜브에서 200ul씩 따서 OD값을 측정했습니다.

0번 튜브 : 균 원액 -> OD : 1.758
1번 튜브 : 균 100ul + PBS 900ul (1/10) -> OD : 0.43
2번 튜브 : 균 100ul + PBS 900ul (1/10^2) -> OD : 0.053
3번 튜브 : 균 100ul + PBS 900ul (1/10^3) -> OD : 0.007
4번 튜브 : 균 100ul + PBS 900ul (1/10^4) -> OD : 0.004

그 다음에 각각 튜브에서 20ul씩 따서 PBS 80ul와 섞어서 희석 후
10ul씩 blood agar plate에 spreading했습니다.

배양 후 colony를 카운팅 했고 아래와 같이 결과가 나왔습니다.
0번 튜브 : 균 원액 -> OD : 1.758 -> 924 cfu
1번 튜브 : 균 100ul + PBS 900ul (1/10) -> OD : 0.43 ->240 cfu
2번 튜브 : 균 100ul + PBS 900ul (1/10^2) -> OD : 0.053 -> 29 cfu
3번 튜브 : 균 100ul + PBS 900ul (1/10^3) -> OD : 0.007 -> 7 cfu
4번 튜브 : 균 100ul + PBS 900ul (1/10^4) -> OD : 0.004 -> 2 cfu

이렇게 나왔는데 희석배수를 곱해주면
원액같은 경우에 4.6 x 10^5 cfu/ml 이렇게 나오더라구요
표준곡선 그린거 첨부 할께요 (왼쪽은 첫번째 실험 결과이고, 오른쪽은 다시 한 실험 결과에요)

문제는 실험에 사용하는 다른 세균들은 2 x 10^9 / 10ul로 양이 많은데
(다른 세균은 제가 colony counting한게 아니고 예전에 누군가 구해놓은 식이에요)
제가 이번에 카운팅한 세균은 이에 비해 매우 많이 부족하다는 거에요

실험 방법이 잘못 된건지.. 두번의 실험에서 비슷한 결과가 나와서 저 콜로니 갯수가 맞다고 한다면 바로 MOI에 적용할 수 있는건지 궁굼합니다.
(예를들어 2.4x10^5의 cell이 seeding 되어 잇고, MOI 1000으로 infection시
O.D값 x 4.6 x 10^5 : 1000(ul)=2.4 x 10^8xwell 수 : A(ul) 이렇게 식을 세우면 되는건가요?
세균의 크기가 문제가 되는 건가요? 다른 세균들보다 C.g가 2~3배 크기는 해요

조언 부탁 드립니다~~

#OD
 
#CFU
 
#표준곡선
답변하기
답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리강시  |  2014.10.22   
표준곡선 그린거 안올리셔서 잘은 모르겠지만......
원하는 정보는 "남이 했을때보다 내가한것은 OD 값에 비해서 cfu가 작다" 이건가요?
대장균도 균주에 따라서 OD 값과 cfu가 차이가 납니다.
서로 다른 종류의 세균이라면 차이가 크게나도 그리 이상한게 안될것 같습니다.
주리  |  2014.10.22    

파일 첨부를 깜빡해서 다시 했어요
cfu의 차이가 얼마 나지 않으면 괜찮은데
저 harvest해서 얻은 1ml에 세균이 460000개 밖에 들어있지 않는다는 건 너무 적은 것 아닌가요? ㅠㅠ

꽃개구리Kozmoj  |  2014.10.23   
1. OD vs CFU 는 세균의 종류에 따라 다를 수 있습니다.
예를 들어 크기가 큰 세포는 같은 cell 수에 OD 가 더 높게 나올 수 있습니다.

2. 첨부한 파일을 보니 희석 배수를 100 으로 잡았더군요.
원액 1 ml 에서 20 ul 를 취해서 100 ul 를 만들고 그 중 10 ul 를 취해서 spreading 을 했다면 
마지막의 10 ul 에 들어 있는 원액의 양은 2 ul 일 것입니다.
그렇다면 단위를 ml 로 만들기 위한 희석배수가 100 이 아니라 500이 되어야 합니다.

3. CFU vs OD standard curve 를 만들려면 균을 1/2 희석해야 합니다.
그래서 OD 범위가 0.1 에서 1.0 (개인적으로 0.6) 사이에 오는 점들을 취해 standard curve 를 만들어야 합니다.
왜냐하면 0.1 이하, 1.0 이상은 OD 측정의 유의 범위를 벗어나기 때문입니다.

답변하기
할인행사/신제품신기술 광고 검색광고
필코리아테크놀로지 필코리아테크놀로지
물질 상호작용 분석기 : Creoptix WAVE delta
이노진텍 이노진텍
[WATSON] "필터팁 1+1 EVENT", "Best 상품 추가 증정 행사" 진행중!! (8.30까지)
필코리아테크놀로지 필코리아테크놀로지
원하는 VOLUME으로 3+1 ! 3개 구매시 1개 무조건 증정! (~23.06.30까지) (12.31까지)
마이크로젠타스 마이크로젠타스
[ExoCAS-2™] 샘플에서부터 엑소좀 까지 고농도 고순도 고회수율로 추출해주는 Exosome Isolat..
에이비클로널코리아 에이비클로널코리아
1차 항체 20µL 균일가(최대 50% 할인) 행사_ABclonal Korea (6.16까지)
필코리아테크놀로지 필코리아테크놀로지
NEB Luna Universal qPCR 2+1! (12.31까지)
최근등록   더보기 >
subcloning insert가 계속 중간에서 잘려서 들어가는데 왜그런건지 아시는 분 있...   06.10
항균성 오류 원인...   06.10
qPCR 시 UDG 농도   06.10
single cell RNA sequencing 같은 data를 다루는 법 과외..받을 곳...   06.09
ADAM cell counter 사용해보신 분들 계신가요?   06.09
캔맥주, 병맥주 바닥에 있는 yeast 찌꺼기를 되살릴 수 있습니까?   06.09
웨스턴 Western Blot 실험 관련 질문드립니다.   06.09
60 pi dish DNA transfection   06.09
hemocytometer 관련 실험 중 질문입니다!   06.09
ripa buffer 처리 후 deep freezer 보관   06.09
투표진행
Q. 세포 실험할 때 장갑을 끼고 하시나요?
참여하기
최근답변자 우수답변자
대왕개구리SPEED

꽃개구리bio

올챙이밍고

알나만안돼

개구리범수리

개구리푸른고래

대왕개구리강시

뒷다리쿵쿠따리쿵쿠..

대왕개구리SPEED

개구리secu

개구리별숲

개구리식스센스

개구리G.P.Ts

개구리A'ANE

대왕개구리안재진

꽃개구리느림보

실험관련연재
세오 연재중실전 실험 프로토콜 101
세오 (필명) (Cincinnati Children’s Hospital Medical Center)
신코 연재중분석장비 이야기
분석장비 탐험가 (필명) ((주)신코)
곽민준 연재중랩노트
곽민준 (POSTECH 생명과학과)
박은총 연재마감후배에게 주고 싶은 면역학 노트
박은총(Duke University)
Mr.S 연재마감의학계의 Spectaculum: 임상시험
Mr. S (필명) (연세대학교)
에스프리 연재마감실험을 해봅시다
에스프리 (필명)
이제욱 연재마감생명과학자 기초체력 다지기
이제욱 (오송첨단의료산업진흥재단, 신약개발지원센터)
위로가기
실험 홈  |  실험FAQ
 |  BRIC소개  |  이용안내  |  이용약관  |  개인정보처리방침  |  이메일무단수집거부
Copyright © BRIC. All rights reserved.  |  문의
트위터 트위터    페이스북 페이스북   유튜브 유튜브    RSS서비스 RSS
필코리아테크놀로지 광고