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레벨5
sukeun03
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15.06.06 14:13
안녕하세요.
우선, 안티바디 재사용은 권하지 않습니다. 저는 예전에 ICC 및 IHC에 경험이 많으신 박사님으로부터 형광염색에 있어서 재사용은 거의 성공하지 않는다는 말을 들은 바 있습니다. 웨스턴 블로팅에서는 여러 번의 재사용이 가능하다는 점과 다른 점이지요.
대신 실험조건에서 몇가지 trouble shooting 해볼 수 있겠습니다.
1. 고정시간이 좀 길다고 느껴집니다. 지나친 고정은 antigen을 망가뜨릴 수 있습니다. 지금의 절반으로 줄일 수 있겠습니다. 또한 cold methanol로 고정하는 방법도 시도해 볼 수 있겠습니다. formalin으로는 절대 안되는 것이 methanol에서 기가 막히게 잘 되는 경우도 꽤 있습니다.
2. blocking 용액에 들어가는 serum은 5%정도로 낮추어도 무방할 것 같습니다.
3. secondary antibody는 어느 회사 제품인지 모르겠지만, 외국 브랜드의 경우 1:250~1:500 정도도 충분히 가능합니다. 1:100 일 경우 background 시그널을 강하게 만드는 요인이 될 수 있습니다.