|
| 전체 > Molecular Biology-DNA > DNA Modification |
|
 |
|
|
 |
Quikchange site-directed mutagenesis에서 궁금한 점이 있습니다. |
|
|
mutagenesis | 2007.12.15 11:56
|
답변있는 질문은 수정/삭제 불가(☞문의) |
strategene에서 판매하는 kit를 이용해서 mutagenesis하는 방법에서..
질문이 있습니다..(좀 엉뚱할 수도 있어요)
mutation 시키고자 하는 염기가 포함된 상보적인 primer를 이용해서
plasmid 전체를 PCR 하는데..
첫번째 cycle에서 plasmid의 ssDNA를 template로 해서
합성된 ssDNA(mutated nt 포함)가 마지막에 nick을 형성하면서
plasmid ssDNA와 붙어있다는 것 까지는 이해가 가는데..
결과적으로 상보적인 nicked DNA가 각각 서로 반대되면 서열의 plasmid ssDNA에 붙어있지 않습니까?
그렇다면, 다음 cycle에서 annealing 단계에서 전 단계에서 만들어진
상보적인 nicked DNA가 서로 붙어서 그냥 linear dsDNA가 만들어지고
최종적으로 PCR product는 양끝에 primer bind site를 중복해서 가지는 linear dsDNA가 만들어 질 가능성은 없나요? |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
| |
|
 |
본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다. |
|
|
 아라곤 | 2007.12.13
|
|
|
|
|
그림을 그리면서 설명하면 쉬운데 글로는 설명하기가 어렵습니다.
최종적으로 PCR product는 양끝에 primer bind site를 중복해서 가지는 linear dsDNA가 만들어 질 가능성은 없나요?
-> 그럴 가능성은 없습니다. PCR의 원리를 잘 생각하면서 한번 그려보세요. |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
아라곤님 답변 감사합니다..
그림으로 설명해 주시면 훨씬 쉽게 이해할 수 있을거 같은데..저도 좀 답답하네요..
제가 정확히 이해한건지는 잘 모르겠습니다만..
linear dsDNA가 만들어 질수 없다고 하는 이유가
혹시 두 primer가 plasmid의 서로 반대편 쪽 같은 위치에 붙을 수 있도록
상보적인 서열로 같은 크기로 제작되었서 그런가요?
제가 똑바로 이해하고 있다면..질문 한 가지 더 드릴께요...
primer가 그림처럼 약간 서로 비켜서 붙도록 제작되면 어떻게 됩니까?
primer 1:5''----------------3''
3''-----------------5'' primer 2
|
|
|
|
아라곤 | 2007.12.13
|
|
|
|
|
전에도 이런 비슷한 질문이 한번 올라왔었던 것 같은데요..
mutagenesis kit은 정상적인 pcr amplification하고는 전혀 다릅니다. 정확히 말씀드리자면 PCR이라고 할 수 없습니다.
질문자께서 물어보시는 상황은 정상적인 pcr이고 당연히 primer를 포함한 dsDNA가 만들어집니다만, mutagenesis 상황은 pfu가 plasmid를 한바퀴 돈 다음에 5->3 exonuclase 기능이 없기 때문에 거기서 반응이 정지합니다. 그러니 primer binding site가 포함이 될 수 없지요.
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
 |
|
 |
 실험조아
 연람
Viiiiiii
 SPEED
미니이리
Eigen
cslee
기적
|
|
|
SPEED
 juno
Kozmoj
Lucid
빛초롱
냥냥아빠
엘피스
Ip Man
|
|
|
|
|
|
실전 실험 프로토콜 101
랩노트
