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 전체 > Cell Biology > Transfection
조회 2612  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 caspase-8 gene transfection 후 colorimetric assay
키티  | 2015.08.20 22:24
답변있는 질문은 수정/삭제 불가(☞문의)

caspase-8 유전자를  Prodomain을 제거한 서열을 pc3.1 hig vector cloning하여 fish cell에 transfection하였습니다. transfection후 50h때 caspase-8 활성을 보는 caspase-8 Colorimetric Assay 하였습니다. 근데 Nomal cell 이랑 아무런 차이가 없습니다. 

 Colorimetric Assay  새 kit사용해서 아무런 문제가 없을꺼같구요
transfection 부분이나 overexpression 과정에서 뭔가 문제가 있을꺼 같은데
무엇이 문제일까요? caspase-8 transfection 시키면 알아서 dimer를 형성하여 protein를 만드나요? 아니면 만들어지는건 mono인가요? ㅠㅠ 개념이 확실히 안잡히네요.  caspase-8 활성을 가지려면 dimer 가 되야된다고 알고있거든요 ㅠㅠ 도와주세요

#caspase
 
#transfection
 
#colorimetric
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개구리sean  |  2015.08.21   
transfection 혹은 발현에 대한 control은 있는지요? 발현 여부를 웨스턴 블랏 등으로 확인하는 것이 우선 필요할 것 같습니다.
그리고 prodomain 없이 transfection 하는 것이 일반적인 건가요?
그렇다면 다른 자극 없이 overexpression 만으로도 활성화 되는지 확인이 필요하겠구요.
caspase 활성을 보려면 최대로 활성화 되는 시점을 선택하는 것이 중요하다고 들었는데 50시간 후에 활성을 보는 게 일반적인 방법 맞나요?
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