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 전체 > Cell Biology > Cell Culture
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질문 SH-SY5Y cell 질문드립니다...ㅠㅠ도와주세요
올챙이cell.....  | 2016.04.26 10:51
안녕하세요 실험을 열심히 하고 있는 석사생 입니다...
다름이 아니라 이번에 SH-SY5Y cell을 ATCC에서 분양 받았는데요..
DMEM/F12 media를 많이 쓰는 것 같아서 (논문을 많이 참고..)
이 media로 stock을 풀었는데 잘 안붙는 것 같아서요..
처음 다루는 cell 이다보니 더블링타임도 잘 감이 안와서..어느정도 되나요 쓰시는분들?
MEM media를 쓰라고 권장되어 있던데... 많이 다르진 않은 것 같아서요..
어떤걸 더 많이 사용하시나요 ?
#sh-sy5y
 
#neuroblastoma
 
#cell culture media
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
개구리seraphina  |  2016.04.26   
DMEM glucose 4.5로 10% FBS, 1%P/S넣고 사용합니다.
빨리 자라는 편이라 2-3일정도면 금방 찹니다.
QAG  |  2016.04.26    

media 같은 경우는 저 역시 DMEM/F12 에 10%FBS 1%P/S를 사용했습니다.
이거는 제가 속한 랩에서 이렇게 셀을 컨트롤 해서 크게 문제는 되지 않았습니다.

더블링타임은 48시간으로 알고 있고, 처음 분양받을때는 좀 많이 떨어지긴 하겠지만
곧잘 붙어서 자랄 것으로 생각됩니다. (따로 플레이트 코팅은 하지 않았습니다)

출퇴근 전에 안부인사 하고 잘 케어해주시면 잘 붙고 자랄 거 같습니다.

올챙이cell.....  |  2016.04.26   
감사합니다
처음다뤄보고 사용하는 cell line 이라서..
권장하는 media를 사용하지 않은것에 대한 불안감이 컸었는데..
^^ 계속 지켜보고 케어하면 나아지겠죠?
답변 너무너무 감사합니다!!!
개구리바보에게바보가  |  2016.04.26   

그렇게 빨리 자라지 않던데요. 제가 가지고 있는 20여종의 세포주 중에 가장 늦게 자라는 세포였던 것 같습니다. 그렇지만 컬쳐에 무리는 없습니다. 저도 DMEM high glucose에 10% FBS로 무리없이 배양하였습니다.

올챙이cell.....  |  2016.04.28   
바보에게바보가 님 ..그럼 며칠에 한번씩 subculture 하셨는지 여쭤봐도 될까요?
지금 ...엄청나게 늦게 자라는 것 같고 엄청 붙지도 않네요..
ㅠㅠ..DMEM high glucose는 아니지만 이것도 써볼 생각 입니다
가장 잘 붙고 잘 자라는 media로 키우려고요...
자라는 속도도 느리고 붙는것도 엄청 느리네요..잘 붙지도 않고
계속 확인해주고 media change도 해주는데 인내를 가지고 키워야 하는 cell 인것 같습니다..
ㅠㅠ...media change할때도 엄청 조심스럽게 붙은 cell이라도 안떨어지게 하느라 조심스럽게 합니다만...ㅠㅠㅠㅠㅠㅠㅠㅠㅠ걱정됩니다....
개구리닥님  |  2016.04.28   
제 경험을 바탕으로 말씀드립니다.

저도 처음에 SH-SY5Y cell 때문에 애를 많이 먹었습니다.
저는 한국세포주은행에서 분양받아서 사용하였으며, 한국세포주은행에서의 권장배지는 MEM 배지입니다. ATCC는 DMEM/F12 미디어를 사용하라고 합니다. 하지만 배양해본 사람들 이야기를 들어보면 DMEM high glucose에서도 잘자란다고 하여 테스트 해보았는데... 저도 DMEM 에서 제일 잘자라는거같아 현재 DMEM high glucose, sodium pyruvate 조건에서 배양하고 있습니다.

그리고 일반적으로 잘떨어지는 cell 이다보니 media 교환이나 washing 과정에서 cell 이 많이 떨어 지기때문에 조심하셔야합니다. DMEM/F12 media는 DMEM에 비하여 빨리자라지는 않지만 쉽게 떨어지지 않는거같더라구요. 그리하여 저는 cell culture 에는 DMEM을 사용하며, confocal dish, well plate 또는 일반적인 실험을 하는 과정에서는 DMEM/F12 media를 사용합니다.

DMEM에서 잘자라는 편이며 T75에 1M으로 셀을 배양하면 2일뒤 subculture 하였던 것으로 기억합니다.
올챙이cell.....  |  2016.04.28   
닥님.. 정말 감사합니다^^
아무래도 정말 인내를 가지고 키워야 할 것 같습니다..
오히려 안붙은 cell을 다른 plate에 옮겨주니 또 붙는 cell들이 있어서 버리기도 힘들고
ㅋㅋㅋㅋ지금 시행착오라 생각하고 조건 열심히 잡아서 잘 자라게 해보겠습니다 ㅜㅜ
경험을 토대로 말씀해주신 모든분들 다 감사합니다
많이 배웠습니다!!!!!! ㅜㅜ정말 감사합니다!!!
개구리seraphina  |  2016.04.28   
잘 안붙거나 잘 떨어진다면 poly L lysine 등으로 디시 바닥을 코팅해보세요.

경험상 컨플루엔시가 낮을때 잘 자라지않아 서브컬쳐 할때 1:2로 서브컬쳐 해주었고
2-3일에 한번 서브컬쳐 해주었습니다.
몇년만에실험..  |  2022.01.13    

안녕하세요 너무 오래된 일이지만 기억하실려는지 모르겠습니다

혹시 질문자님! 셀이 안붙는다 하셨는데 저도 지금 같은 상황이라서요..

이 셀을 5년정도 키운적이 있었는데 저도 사용한 배지가 DMEM F12 + FBS 10% + P/S 1% 이거였거든요. 아무 문제없이 잘 키우고 잘 자라고 했었는데 최근 한국세포주은행에서 산 세포가 전혀 붙지를 않네요.... 심지어 여기서 보내준 passage 넘버도 19......ㄷㄷㄷ 

그쪽에선 셀에 문제없다고 하는데 SH-SY5Y cell 특성상 넘버가 오래되면 좋지 않다고 알고있거든요...

그래서 이 글의 요는 셀이 붙긴 붙으셨나요??ㅜㅜ 세포주은행에서 받은지 3일짼데 붙을 생각을 안하고 전혀 cell morphology도 아니예요...ㅜㅜ

지덕이  |  2022.12.21    

DMEM high glucose로 진행중인데 오늘 한국세포주 은행에서 

stock p.20이 와서 풀고 세시간 뒤에 확인해보니 잘붙었더라구요 

한번 F12가 아닌 high glucose로 진행해보세용!

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