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 전체 > Molecular Biology-DNA > Gene Cloning
조회 2991  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 cloning 후 enzyme cut이 되지 않습니다.
cloning 초보  | 2016.08.18 17:39
답변있는 질문은 수정/삭제 불가(☞문의)
Cloning 진행중 enzyme cut관련 질문입니다.

Transfomation 뒤 vector를 뽑아서 gel에 걸어보니 insert가 잘 들어가게 shift 사이즈에 맞게

확인하였습니다.

문제는 잘 들어간게 맞는지 확인하기 위해 enzyme cut을 실시하였는데요

cut된 insert band가 확인되지 않습니다.

enzyme site는 EcoRI / NotI 이렇게 이용하였고,

교수님은 insert가 확인되어야 한다, 같이 실험하는 친구는 sequencing을 해봐야한다

의견이 갈립니다.

보통 잘 cloning이 진행되었는데 이런 현상이 발생하는지 궁금하여 질문 드립니다.


#cloning
 
#enzyme cut
 
#insert
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
개구리순똘  |  2016.08.18   
정보가 부족해서 뭐가 문제인지 잘 모르겠네요.

혹시 INSERT 크기가 너무 짧아서, 안보이는 것은 아닐까요? 짧아서 GEL을 빠져나간다는 것도 문제지만, 짧으면 그만큼 EtBr이 덜 달라붙기 때문에, band intensity가 얀해서 안보일 수도 있습니다.

혹은, DNA가 똑같은 길이를 갖고 있더라도, linear form, circular form에 따라 밴드의 위치가 달라지고, circular form의 경우, super coiled form인지 아닌지에 따라 밴드의 위치가 달라집니다. 이런 것 때문에, data 해석을 실수하실 수도 있을 것도 같네요.

그리고 저희는 클로닝 후, 시퀀싱으로 확인을 꼭 합니다. mutation이 생길 수도 있기 때문에, 꼭 해봐야 하는데, 어차피 해봐야 하는 것이기 때문에 그냥 시퀀싱 해보시길 추천드립니다.
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