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여러가지
(비회원)
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16.09.21 17:26
WB에서 band가 잘 안나오는 경우는 다양합니다.
동일한 단백질양을 로딩하였다고 해도 세포가 가지고 있는 특정 단백질들의 양은 각각 다를 수 있습니다. 간단히 이야기 하면 위에 적어놓은 parp, casp3, actin 등의 단백질 양이 p53, mdm2 보다 많다면 WB시 band가 당연히 다르게 나옵니다.
물론 이 경우는 세포 종류마다 다릅니다. 또한, 실험을 어떻게 하느냐에 따라서 변화하기도 합니다. control로 사용하는 actin 의 경우는 예외적입니다. (거의 일정하다고 생각하죠.)
또한, 1차 Ab의 특수성이나 친화력이 다를 수 있습니다. WB 후 membrane에 동일한 양에 단백질들이 붙어 있더라도 1차 Ab의 결합 유무에 따라 WB band에는 차이가 발생합니다. 이 경우에는 다양한 회사의 Ab를 사용하거나 참고문헌들을 확인해야 알 수 있습니다.
WB시 한개의 membrane으로 여러개의 Ab를 확인하기 위해 stripping을 하는 경우에는 stripping 과정에서 단백질이 membrane에서 떨어져나가기 때문에 나중에 확인하는 Ab의 band가 약하게 나오거나 안나오는 경우가 있습니다.