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 전체 > Molecular Biology-Protein > Western Blot Analysis
조회 3854  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 caspase-3 (추가질문이에요.)
caspase-3  | 2006.04.12 00:00
답변있는 질문은 수정/삭제 불가(☞문의)
우선. 답변해 주셔서 너무나. 고맙습니다. ~
cleaved caspase-3 의 분자량이 17kda 으로 분자량이. 제가 보고 있는 안티바디중
제일 작습니다. 저는 gradient gel을 사용하고 있습니다. 단백질량은(40ug)
그리고 제가 사용하는 cell 라인은 caspase의 타겟이 있습니다..
혹시 분자량이... 작을 때 SDS-page농도를 바꾸어야 하나요..
아참.. 그리고 인산화된 활성형 형태의 안티바디들은.. 잘 나오지 않는데요.
혹시 인산화 형태는.. 더 주의할 점이 있나요..?
#caspase-3
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bio  |  2006.04.12    
제가 지금 같은 cell signalingd에서 나오는 caspase-3 쓰고 있거든요..^^
SDS-PAGE로도 충분히 잡힙니다..안티바디 확실합니다..
제경우는 15-16% gel을 쓰고 있습니다..
10-15 KDa 짜리 protein도 잘 잡히니깐 걱정하지 않으셔도 되구요..^^
단백질 양을 좀 늘려주시는게 좋을듯 합니다..
전 보통 50-100ug을 걸어주거든요...
cell signal에서 positive control을 판매하는데..
Jurkat cell에 STS를 처리한 것입니다..
혹시 Jurkat이 있으시다면 이것을 control로 쓰시면
정말 빠방한 band를 확인하실수 있습니다..^^
phosphorylation이 되었다고 특별히 잡는데 어려움이 있는거 같지는 않은데요..
아무래도 양이 적게되면 잘 안잡히니깐..
p-akt 경우 정말 힘들더군요..
그리고 ECL solution이 중요한 요인중에 하나인데..
pierce에서 나오는 pico kit이 있거든요..
요거 젤로 확실하고 맘에 듭니다..
femto kit도 있는데 이건 너무 잘 잡아서 background가 좀 지저분해지는 경우가 있거든요 secondary를 너무 많이 너어주게 되면...
pierce거 쓰시면 왠만한거 다 잡힌다고 봅니다..^^
(요 회사랑 관련 없거든요...-_-)
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