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 전체 > Immunology > Immunocytochemistry
조회 5037  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 immunocytochemistry 관련 질문
학생  | 2008.08.09 20:23
답변있는 질문은 수정/삭제 불가(☞문의)
rabbit에서 분리해 낸 특정 단백질에 대한 항체의 워킹 여부를 확인하기 위해서

immunocytochemistry를 하고 있습니다.

그런데, 제 단백질이 세포 표면에 발현하기 때문에

immunocytochemistry 과정 중 Permeation 과정을 빼고 immunocytochemistry를 했는데

2% PFA로 고정을 해서 그런지 permeation이 되어서 컨트롤로 넣어준 phalloidin이

F-actin을 잡았습니다.

그래서 아예 PFA로 고정하기 전에 1st Ab를 상온에서 한시간 반응시킨 후에

여러번 워싱하고 PFA로 고정하였더니, Cell의 모양이 응축되거나

cell이 거의 떨어져 나가서 관찰이 힘든 상황입니다.

제가 알고있는 방법말고

세포 표면에 발현되는 protein만 볼 수 있는 immunocytochemistry 방법을 아시는 분

조언좀 부탁드립니다.
#immunocytochemistry
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리엘피스  |  2008.08.11   
좀 이해하기가 어렵습니다.
membrane protein이건 cytosol protein이건 fixation/permeation과정은 모두 거칩니다. palloidin이 염색된 것은 palloidine이 확산에 의해 그냥 들어갔기 때문이며, cell membrane은 죽은 후에는 palloidine정도는 쉽게 투과를 시킵니다. fixation과는 전혀 무관한 내용으로 보입니다.

Fixation은 세포의 구조물을 있는 그대로 잡아두는 역할입니다.

Membrane protein을 잡을때도 fixation/permeation과정을 거치는 이유는 membrane에만 특이적으로 항체가 작용했다는 일종의 control이 될 수도 있기 때문입니다. membrane protein인데 cell 전체에서 잡혔다면 이는 항체의 quality가 않좋거나 또는 실험이 잘못된 것으로 해석할 수 있습니다.
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