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transformation후 colony가 저만 안떠요.. |
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 실험잘되자(과기인) | 2019.02.03 12:56 |
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안녕하세요!
transformation 관련해서 찾아보다가 저같은 경우는 없으신것 같아 직접 질문을 올립니다 ㅠㅠ
몇달 간 cloning 업무를 맡아서 잘 진행 했었는데 삼주 전부터 갑자기 아예 되지가 않습니다.. 같은 샘플로 ligation, transformation을 몇번 진행을 해도 콜로니가 아예 안뜨거나 1~4개 뜨는 정도입니다. (저와 동시에 제가 잘라 사용한 vector와 pcr products로 ligation부터 같이 진행해주신 다른 선생님은 50개 이상 떴습니다)
ligation 문제인가 싶어 제가 같은 것을 2개 ligation시켜 저와 다른 선생님이 transformation을 했는데 저는 8개 뜨고 선생님은 50개 이상 뜹니다..
아무래도 transformation에 문제가 있는 것 같은데 선생님과 바로 옆에서 진행했기 때문에 같은 컴셀 사용, 시간, 조건 모두 똑같았습니다.
컴셀 넣고 탭핑 후 ice 20분
heatshock 1분 30초
Ice 2분
배지100 ul넣고 30분 incubation (30분 이상을 해도 마찬가지입니다)
전체 spreading
심지어 제가 아무처리하지 않은 plasmid를 re-transformation 해도 효율이 썩 좋지 않게 나타납니다. (보통 다른 분들은 같은 컴셀 썼을때 꽉 차게 나타나도 저는 최근에 50개 정도 거나 6개 정도 뜰 때도 있었습니다)
조건은 ice에 받아놓는 시간이나 incubation시간을 늘려도 잘 안됬습니다..
제손이 컴셀 효율을 낮추는 걸까요..
제가 실험하는 과정을 옆에서 다른분이 봐주셔도 이상 없다고 하셨습니다 ㅠㅠ 도대체 뭐가 문제인 걸까요?
한 두번이 아니라 지금 삼주넘게 안되고있으니 굉장히 큰 문제 같습니다. 이 실험을 앞으로도 쭉 해야하는데 영원히 안될까봐 두렵고 무섭기까지합니다 ㅠㅠ
그리고 트랜스포메이션도 저 조건대로 지금까지 삼개월 넘게 해왔을때 잘 됬었는데 갑자기 안되니 답답하기만 합니다.
혹시라도 저같은 경험이 있으셨거나, 효율을 높이기 위한 방법 등을 아신다면 조언 부탁드립니다 ㅠㅠ
(참고로 amp배지에서 키웁니다)
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#transformation #cloning |
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