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질문 IHC로 F4/80 (macrophage) 을 보려고하는데 안됩니다 도움부탁드릴게요..
올챙이앙재문(과기인)  | 2019.03.25 10:14
첨부파일 파일첨부: l104.jpg (452 KB)
이미지 첨부파일

Primary antibody : F4/80 Antibodies, Bio-rad, MCA497G

Secondary antibody : Goat anti Rat IgG2b:HRP, Bio-rad, STAR114P

Vectastain : ABC KIT, Vector labs, PK-6100

DAB : DAB Quanto, thermos scientific, TA-125-QHDX

사용하였습니다

Liver 조직슬라이드 deparaffinzation 후 antigen retrieval 후에

블록킹> 3% h202 10min, goat serum 20min incubate 하였습니다.

Primary antibody : F4/80 Antibodies, Bio-rad, MCA497g로 24시간 o/n 하였습니다.

다음날 Vectastain : ABC KIT, Vector labs, PK-6100 으로 30분 incubate 후에 

Secondary antibody : Goat anti Rat IgG2b:HRP, Bio-rad, STAR114P 부착하였습니다.

  1. Scientific Ultravision Substrate Detection System (DAB) 처리 후 hemotoxylin 염색하고 마운팅하여 확인하였는데 호가인이 안됩니다.

무슨 문제인지 알고싶습니다.

키트들은 전부 새거로 사용하였습니다.
#ihc
 
#f4/80
 
#macrophage
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
imperialvet@nate.com  |  2019.03.25    
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

abc kit를 쓰는데 왜 HRP가 conjugate 되어 있는 2차 항체를 적용시켰는지.. ABC kit는 biotinylated secondary antibody 에 부착될겁니다.  

그리고 쓰시려거든 2차 항체를 적용시킨다음 ABC reagent를 적용시켜야 하지요.

다만 선생님께서 이용한 protocol에서 ABC 과정을 제외한 다른 부분은 크게 무리 없어보이므로 1, 2차 항체 희석농도를 올리든지, 

biotinylated secondary ab를 붙이고, abc를 붙여서 발색을 해보시는 걸 시도해보세요.
올챙이앙재문  |  2019.03.26   

말씀감사드립니다. 조언해주신대로 다시 해보겠습니다^^
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