실험 Q&A Plant Biology > Transient Expression
crispr-cas9으로 target gene을 자른 후 그 유전자의 발현 정도를 알아보고 싶어요
레벨1 ㄱㅁ (대학원생)
crispr-cas9으로 target gene을 자른 후 그 유전자의 발현 정도를 알아보고 싶어요
cas9벡터로 target 유전자를 자른 후 아그로박테리움을 사용해 식물체에 접종한 후 식물체까지 봤는데요
이제 식물체의 잎을 채취에 RNA를 뽑아 cDNA를 합성 후 qPCR(Real time PCR)로 이 유전자의 발현 정도를 알고 싶습니다.
1) cas9벡터로 타깃유전자의 일부를 잘라냈다면 qPCR 결과를 봤을 때 밴드가 안떠야 하죠?
2) cas9벡터에 ligation 하기 위해 가이드RNA의 프라이머를 짜놓은것이 있는데, qPCR할 때 타깃유전자이 프라이머들을 그대로 사용해도 되는지? 아니면 qPCR을 하기 위해선 프라이머를 새로 짜야하는지 궁금합니다.
3) 만약 새로 짜야 한다면 어떻게 짜는건가요..?
4)qPCR을 이용하여 제가 자른 유전자의 RNA 발현 정도를 보고 싶은데, RNA 발현 정도를 보고싶을 때도 Total RNA 뽑은 후 cDNA를 합성한 후에 qPCR을 해야하는 건가요?
Bio마켓 프리미엄