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질문 standard curve그리기
올챙이tape(대학원생)  | 2019.12.27 14:05

전에 질문 올렸었는데 답변이 없어서 재질문 올립니다...

제가 E.coli의 standard curve를 그리고자 하였습니다.

먼저 staionary phase인 8 h배양한 cell의 OD값은 17.167이었고 두개의 plate에 plating하여 10^8CFU/mL라는 것을 먼저 확인했습니다.

그런 뒤, 8h 배양한 cell을 10^7, 10^6, 10^5, 10^4....이렇게 serial dilution을 하고 각각 plate 2장에 spreading하고 OD값도 측정을 하였습니다.

그래서 cell수와 OD값 사이의 관계를 그래프로 그렸는데 다음과 같이 나타났습니다.

upload_image

여기서 실선은 OD값과 세균수(로그값)사이의 관계를 나타내고 점선은 추세선을 타나낸 것인데 선형관계를 나타낸 것인데

standard curve가 이렇게 나오는게 맞는지요??

또 제가 배양을 할 때 6h에 stationary phase에 딱 도달을 해서 8h때인 것을 사용했는데 다른 논문을 보니 stationary phase라고 하면 24h배양한 걸 많이 사용하는 것 같았습니다.(E.coli의 경우)

그래서 stationary phase라면 어느시간 때를 사용하는 것이 적절한지 알고 싶습니다.

그리고 plate를 5개는 하는게 좋다고 답변을 받았었는데 각 희석배수마다 5개씩을 해야할까요?? 즉, 10^1~10^3까지라면 3X5=15개를 해야한다는 것인가요??

- 추가적으로 plating말고 미생물의 death phase를 확인하는 방법과 flow cytometry나 단백질 측정으로 균수를 확인하는 방법을 알고 싶습니다ㅠㅠ

#E.coli
 
#standard curve
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  2019.12.27   
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

저번 질문에 답변을 올렸는데 다시 올립니다.

- 8h는 stationary phase가 아닙니다.

- STN curve를 그려서 mid log ~ log phase 균을 사용하는 것이 좋습니다.

- 생균수 측정은 개인적인 실험 skill(피펫팅, 희석, spreading 등)에 차이가 많이 

있기때문에 1회 실험에서 희석 단계별 plate를 많이 해서 평균을 구하는 것이

오차를 줄일수가 있습니다.

- OD 대비 생균수 측정 실험을 3회 정도는 해서 OD vs cuf 상관계수를 구하는

것이 좋습니다.

올챙이tape  |  2019.12.27   

답변주셔서 감사합니다

upload_image

제가 growth curve를 3반복해서 그린 결과인데 8h이면 stationary phase가 아닌가요??

그리고 다른 분이 답변해주셨을 때는 staionary phase의 cell로 측정하는게 맞다고 하셔서 그렇게 했는데 

그럼 mid log의 균을 사용하는게 더 정확한 방법인가요??

대왕개구리SPEED  |  2019.12.27   
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

curve 모양을 보니 초기 접종량이 많은 느낌이 드는데 growth curve를 그릴 때

초기 접종량은 O/N 배양액을 배지양 대비 얼마를 넣었나요?

그리고 OD vs cuf를 정확히 구할 때 균체 크기가 일정한 시점의 균을

이용하는 것이 좋습니다.

 

올챙이tape  |  2019.12.30   

전배양액은 18h overnight배양하였고

전배양액을 본배양액의 1%가 되게 넣었습니다

(ex? 본배양액: 100 mL, 전배양액 1mL)

접종하자마자 균수가 6.65*10^5 정도였습니다.

 

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