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질문 Flowcytometry 할때 항상 cell number 맞춰 찍어야하나요?
알아바라(대학원생)  | 2020.05.10 02:36

요약하면 질문은 두가지입니다.

1. cell number를 꼭 동일하게 맞춰야할까요?

2. 선생님들께서는 실험하실때 늘, 일일히 cell number를 count하시나요?

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flow cytometry 세팅하시던 분이 계셨는데.. 나가셔서 자문구할곳이 없어 이렇게 글 남깁니다.

그 분께서 알려주신대로 루틴하게 cell number=10^6, titer는 대략 1:100~1:200 을 사용했습니다.

그러다가 이제서야 Ab sheet를 자세히 보게됐는데 의문이 생겼습니다.

 

10^6 이라고 제시된 sheet도 있지만, 10^5~10^8 이라고 광범위(?)하게 나온 sheet도 있었습니다..

 

물론 면역학을 배울때 Ag-Ab 비율이 적당해야 'equivalence '라 최고 효율을 나타낸다고 배워서 titer가 중요한건 이론상으론 알겠는데,

10^5~10^8 은 range가 큰 것이 아닌가, 혹시 실전에서는 equivalence는 큰 영향을 미치지 않는것인가 하는 생각이 들었습니다.

 

mouse실험을 할때 주로 flow cytometry 분석을 하고있는데요

peritoneal cell 같은 경우는 지금까지 10^5~10^8 안에 들어왔습니다.

그러면 굳이 매번 counting 없이, isolation한 cell을 그대로 staining 진행해도 될까요?

cell counting 하는데 시간이 많이 지체돼서, 혹시 굳이 counting을 안해도 된다면 시간단축을 할 수 있지 않을까 싶었습니다.

 

선생님들께서는 매 실험마다 counting을 하셔서 수를 맞추는지 궁금합니다.

 

#flowcytometry
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
개구리지나가는사람  |  2020.05.10   

네, 오차는 있겠지만 카운팅을 해서 진행하셔야합니다.

어떤 실험이든, 동일 조건에서 진행해야합니다.

저의경우 FACS Ab 처리 전, 각 cell 을 3회 반복하여 측정하고, 1x10^6 cell 에 가깝게 진행합니다.

그리고, FACS (flow cytometry) 의 원리를 공부하시면 이 문제에대한 답변은 충분히 얻을 수 있을것이라고 생각합니다. 

개구리쥬뗌므  |  2022.05.24   
저는 카운트 안합니다
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