Trypsin/EDTA로 세포를 떼어낼 때 Trypsin/EDTA에 노출되는 시간이 길면 길수록 세포에 demage를 준다고 들어서
100파이 기준 Trypsin 2mL을 처리한 후 인큐베이터에 3분 놔둔 후 배지 2mL를 섞어줘서 피펫팅 살짝해준 후 15mL에 모아주고 혹시모를 남은 cell도 배지 1mL을 넣어서 회수해주는데요..
동량의 배지를 넣으면 Trypsin/EDTA의 작용이라고 해야하나? 독성인지?가 억제된다고 하던데.. 맞는건가요??
(떼어내야 될 dish의 수가 많아서 cell harvest 후 원심분리 시간이 갑자기 걱정되네요..ㅎㅎ)
cell과 trypsin을 같이 긴시간 두는 것은 안좋습니다.
배지를 많이 넣으면 trypsin이 희석되기 때문에 조금 농도는 낮아지지만
빨리 원심분리 해서 제거해주는 것이 좋습니다.
cell 수가 많을 경우는 한번에 다 하지말고 나누어서 하는 것이 좋습니다.
배지에 들어있는 serum이 Trypsin을 불활성화합니다.
다른말로 하면 배지가 없는 media는 안됩니다.
cell에 trypsin을 처리하는 시간은 cell마다 다릅니다. cell에 가해지는 damage를 최소화하고 싶으시다면 cell을 몇 번 체크해서 trypsinize에 필요한 최소 시간을 알고 계시면 도움이 됩니다.
dish의 수가 많으면 차근차근 나누어서 하는 것이 좋습니다.
푸른고래
강시
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느림보
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