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 전체 > Molecular Biology-DNA > Gene Cloning
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질문 Cloning vector enzyme cut 양
알duddhr(대학생)  | 10.26 03:47

안녕하세요?

다름아니라 cloning 할 vector을 enzyme cut해야하는데 그 양을 얼마나 해야할지 감이 안와서 질문드립니다. 그냥 항상 선배님들께서 3ug만 넣어서 자르라고 하셨습니다. 아무래도 계산식이 있을것 같은데 그냥 DNA 3ug 이렇게 만 되어있어서요ㅠㅠ bric 도 찾아보다 비슷한 답변으로  "plasmid 에 있는 dna라면 plasmid 크기가 4kb이고 insert 가 1kb 라면 총 5ug를 잘라야 insert로 사용할 1ug의 dna가 gel에 있다"

라는 답변을 보았습니다. 이계산이 어떻게 되는지도 이해가 가지않고 여기 있는 insert는 vector에서 제가 잘라야할 부분을 칭하는건지 정말 제가 쓸 다른 dna인 insert인지도 모르겠어서 이해가 가지 않아 질문을 올리게 되었습니다...ㅠㅠㅠ

예로 들면 gel extraction 수율이 50% 가정하고 vector의 총 size 는 8kb이고 vector에서 extraction할 부분이 6kb이고 vector의 농도는 150ng/ul ligation은 3:1  로 하고 싶다면 제가 vector를 얼마만큼 농도를 잡아야하나요..? 이 농도에서 ul로 계산하는건 알고있습니다...  말이 너무 두서가 없는것 같아 이해하기 어려우실것 같아서 너무 죄송합니다ㅠㅠㅠㅠ 긴글 읽어주셔서 감사합니다

#cloning
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  10.26 09:48  

cloning에 사용하는 vector양은 실험자마다 선호하는 양은 다릅니다.

저같은 경우 1회 TF에 0.3~0.5ug의 vector를 사용합니다.

따라서 질문에서 vector양은 실험자가 정하면 됩니다.

vector양이 정해지면  1 : 3으로 insert 말단을 vector의 3배로 계산하면 됩니다.

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