실험 Q&A Mol. Biol.-DNA > Gene Cloning
Cloning vector enzyme cut 양
레벨1 duddhr (대학생)
안녕하세요?
다름아니라 cloning 할 vector을 enzyme cut해야하는데 그 양을 얼마나 해야할지 감이 안와서 질문드립니다. 그냥 항상 선배님들께서 3ug만 넣어서 자르라고 하셨습니다. 아무래도 계산식이 있을것 같은데 그냥 DNA 3ug 이렇게 만 되어있어서요ㅠㅠ bric 도 찾아보다 비슷한 답변으로 "plasmid 에 있는 dna라면 plasmid 크기가 4kb이고 insert 가 1kb 라면 총 5ug를 잘라야 insert로 사용할 1ug의 dna가 gel에 있다"
라는 답변을 보았습니다. 이계산이 어떻게 되는지도 이해가 가지않고 여기 있는 insert는 vector에서 제가 잘라야할 부분을 칭하는건지 정말 제가 쓸 다른 dna인 insert인지도 모르겠어서 이해가 가지 않아 질문을 올리게 되었습니다...ㅠㅠㅠ
예로 들면 gel extraction 수율이 50% 가정하고 vector의 총 size 는 8kb이고 vector에서 extraction할 부분이 6kb이고 vector의 농도는 150ng/ul ligation은 3:1 로 하고 싶다면 제가 vector를 얼마만큼 농도를 잡아야하나요..? 이 농도에서 ul로 계산하는건 알고있습니다... 말이 너무 두서가 없는것 같아 이해하기 어려우실것 같아서 너무 죄송합니다ㅠㅠㅠㅠ 긴글 읽어주셔서 감사합니다
Bio마켓 프리미엄