실험 Q&A Plant Biology > Transformation
형질전환 실험 중 궁금한 점이 있습니다! 부탁드립니다!!
레벨2 diamond (대학생)
1. DH5a를 competent cell로 쓰는데 LB broth에 overnight culture한뒤에 다시 cell을 LB broth에 1%로 접종해서 2시간 배양한다고 합니다. 왜 굳이 2번 배양하는 것인가요?
2. 동결보존시에 10% glycerol을 넣는데 왜 하필 10%인가요?
3. competent cell에 vector를 넣어준뒤에 42도씨에서 1분 30초간 heat shock을 하는데 왜 하필 42도인가요?
4. heat shock을 하면 세포막의 인지질층에 틈이 벌어지고 vector가 세포내로 들어갈 수 있게 되고 다시 얼음에 넣어두면 인지질층이 닫히면서 안정화되는것이 아닌가요?
5. 원심분리시에 RPM과 시간은 어떻게 정하는 건가요? DH5a를 접종한 LB broth를 5000RPM/10min으로 원심분리하는데 이 RPM과 시간은 어떻게 정해지는 걸까요?
모르는 것이 너무 많네요ㅠㅠ 찾아봐도 원하는 답이 없어 이곳에 질문해 봅니다 도와주세요!
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