실험 Q&A Mol. Biol.-DNA > Purification/Isolation
Plasmid DNA 추출 수율에 관한 질문입니다
레벨2 월요일좋아 (대학원생)
안녕하세요 plamid DNA 추출시 수율에 관한 질문입니다.
이번에 새로 실험에 사용할 vector가 있는 균주를 해외업체에서 구매했습니다.
Plasmid DNA를 얻기위해 실험실에서 사용하는 kit를 이용해서 miniprep을 진행했는데 균의 양은 충분함에도 불구 하고(처음 균을 모으는 과정에서 눈으로 확인) plasmid DNA 농도가 40ng/ul 정도가 나왔습니다.
제가 miniprep 할때는 평균적으로 150~250ng/ul가 나오는데 40ng/ul가 나와 kit에 문제가 있나 싶어
다른 균주로 miniprep을 해본 결과 plasmid DNA농도는 150~250가 나왔습니다.
제가 선택한 colony가 혹시 문제가 있을까 해서 총 4개의 colony를 대상으로 해봐도 결국 농도는 여전히 50ng 이하였습니다.
현재 사용하는 항생제농도가 문제가 있을까 싶어 항생제가 없는 LB배지에서 배양해도 DNA농도는 여전히 그대로였습니다.
plasmid를 DH5a균주에 넣어서 새로 클로닝하려 해도 vector내에 ccdB gene이 있어 불가능할꺼 같아 문제를 해결하고 싶어 질문드립니다.
추후 실험 진행시 plasmid DNA의 농도가 높아야해서 최대한 높은 농도로 추출하고싶습니다.
지금 제가 생각하는 차선책은 많은 양의 액체배지에 균을 배양해 한곳에 모아서 높은농도의 plamidDNA를 얻는 방법이라고 생각합니다.
Vector size는 16kb이며, vector는 대장균에 들어가있습니다.
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