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타겟 단백질이 dimer 폼으로 있어야 하는 단백질인가요? 아닌가요?
그리고 tagging을 달아서 정제를 하신건가요? 그리고 그 tagging이 사이즈 때문에 dimer라고 생각하시는건 아닌가요?
보통 정제가 끝나면 활성을 확인해봅니다...
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레벨3
지니25
(대학생)
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21.01.25 09:43
dimer가 없어야 하는 단백질입니다.....
DTT를 처리해서 처리하지 않은 것과 같이 SDS-PAGE를 해 보세요.
DTT 처리하지 않았을때는 dimer 크기인데 DTT 처리했더니 monomer 크기로 나왔다면 -S-S- bond 로 결합된 dimer form 단백질입니다.
재조합 다ㅣㄴ백질이 아니라 원래 세포에서 정제했다면 dimer form이 active form으로 생각됩니다.
dimer라는 것은 어떻게 확인했나요?
완전히 정제를 해서 분석하지 않으면 dimer인지 알수 없을건데..
정제는 native form으로 하셨고, PAGE 분석으로 샘플은 boiling해서 진행하셨는데 dimer 폼으로 나온건가요?
그렇다면 western 분석으로도 2개 단백질이 위 아래로 보이는지도 확인해보셨나요?