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질문 signal sequence 뒤에 his tag 붙이기
알yangkim(과기인)  | 02.19 17:15

scfv를 생산하기 위하여 artificial한 signal sequence를 달고 바로 뒤에 6Xhis를 달았습니다.

그 후 nickel column으로 정제를 하였지만 수율이 3%정도로 나오고 있습니다. ELISA를 하면 detection은 되지만 SDS 상으로는 예상되는 size를 보기 어렵습니다. 

하여 his tag이 제대로 발현되지 않다고 생각하였는데, sequence에서 문제를 찾기가 어렵습니다. ㅠㅠ 

혹시 signal sequence 바로 뒤에 his tag을 붙일 경우 발현에 문제를 줄 수 있나요? Cleavage site 바로 뒤에 HHHHHH를 붙였습니다. 

아니면 이 scfv뒤에 다른 단백질도 달려있는데 구조상 N-terminal에 붙이기 어려운 것 일까요?

sequence를 다시 디자인 해야 한다면, tag위치를 바꿀지 아니면 his tag 앞에 다른 서열을 몇 머 추가할 지 고민입니다. 

#정제
 
#his tag
 
#signal sequence
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  02.19 17:23  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

- nickel column으로 정제를 하였지만 수율이 3%정도로 나오고 있습니다

: 정제 수율이 3%라는 뜻인가요?

정제 전에는 SDS-PAGE에서 확인이 잘 되나요?

1. signal peptide가 잘 작동하려면 signal 서열과 뒤의 서열의 극성이 중요

합니다.

2. 현재 구조에서 발현과 his tag은 별개의 문제로 보입니다.

3. cell 내 fraction에서 발현 확인은 어떻나요?

4. 생산 cell과 발현 구조의 최적화를 우선 확인한 후 발현 구조의 변경을

하는 것이 필요할 듯 합니다.

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