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 전체 > Molecular Biology-Protein > Western Blot Analysis
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질문 내가 보고자 하는 밴드 사이즈는 희미하게 뜨고 아닌 사이즈는 진하게 뜬다면..
뒷다리beginner(일반인)  | 02.20 23:54

1차와 2차 붙이는 시간을 줄여야 하는건가요?

줄이면 그나마 희미하게 나오던 타겟에서의 밴드가 아예 안나올까봐서요.

 

1차 4도씨 o/n

2차 4도씨 1h

 

이렇게 실험을 진행했는데요.

보고자하는 타겟 사이즈 밴드는 희미하게 뜨고 

다른 사이즈에서 밴드가 진하게 뜬다면, 어떤걸 조절해야 할까요?

그리고,

펀슈를 진행했을 때 뜨는 모든 밴드가 1차, 2차 후 일부 밴드만 보이는 것으로 보아 non-specific은 아니라고 생각하는게 맞는건가요?

 

 

#western
 
#band
 
#size
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뒷다리Silence  |  02.22 14:08  

질문에 대한 사진 자료가 있으면 설명하기가 좋을것 같습니다^^

 

원하는 밴드가 희미하게 뜬다는것이 약하게 나온다는 말씀인지요

여러가지 조건이 있을것 같습니다만

보통 1차 항체에 섞는 skim milk나 BSA를 바꿔서 하는 경우도 있습니다

BSA를 썼다면 skim milk로... 아니면 그 반대로...

blocking은 skim milk로 하구요

2차는 상온에서 1시간정도 해도 괜찮습니다.

도움이 되셨길 바랍니다.

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