1차와 2차 붙이는 시간을 줄여야 하는건가요?
줄이면 그나마 희미하게 나오던 타겟에서의 밴드가 아예 안나올까봐서요.
1차 4도씨 o/n
2차 4도씨 1h
이렇게 실험을 진행했는데요.
보고자하는 타겟 사이즈 밴드는 희미하게 뜨고
다른 사이즈에서 밴드가 진하게 뜬다면, 어떤걸 조절해야 할까요?
그리고,
펀슈를 진행했을 때 뜨는 모든 밴드가 1차, 2차 후 일부 밴드만 보이는 것으로 보아 non-specific은 아니라고 생각하는게 맞는건가요?
질문에 대한 사진 자료가 있으면 설명하기가 좋을것 같습니다^^
원하는 밴드가 희미하게 뜬다는것이 약하게 나온다는 말씀인지요
여러가지 조건이 있을것 같습니다만
보통 1차 항체에 섞는 skim milk나 BSA를 바꿔서 하는 경우도 있습니다
BSA를 썼다면 skim milk로... 아니면 그 반대로...
blocking은 skim milk로 하구요
2차는 상온에서 1시간정도 해도 괜찮습니다.
도움이 되셨길 바랍니다.
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