[DEBUG-WINDOW 처리영역 보기]
즐겨찾기  |  뉴스레터  |  오늘의 정보 회원가입   로그인
BRIC홈 실험
한국벡크만쿨터
배너광고안내
이전
다음
스폰서배너광고 안내  배너1 배너2 배너3 배너4
브릭이만난사람들
전체보기 안전점검 논문교환 LABox
 전체 > Chemical biology > Analysis
조회 290  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 PCR 실험에서 DNA Band 자체가 나오지 않네요
알김개불(대학생)  | 04.04 01:41

실험실습을 하면서 쥐 DNA를 이용해서 PCR를 했는데 전기영동후에 DNA Band가 아예 보이지 않는데 그 원인을 모르겠네요.

같은 방식으로 진행한 다른 사람들은 결과가 다 나왔습니다. 실험의 사용된 용액에는 문제가 없는데 만약 DNA밴드가 보이지 않는다면 어떤 점에서 잘못된 것일까요? 혹시 어떠한 용액을 많이 넣거나 적게넣으면 DNA 밴드가 아예 보이지 않을까요?

실험과정은 

준비한 쥐 tail을 

Hot solution 75ul 

100도에서 45분간 가열

Ice에 식힘 

cold solution 75ul

centrifuge 4000rpm, 3min 

 

PCR 

PCR MIXTURE :prime Taq premix 10ul

3'D.W: 6ul

primer MIX; 2ul

PCR tubedp PCR mixture를 18ul씩 넣는다

DNA extracted from tailf를 추가한다

PCR실행한다 

 

2.8%의 agarose gel 준비 

삼각플라스크에 1.12g(Agarose)/40ml(1xTAE Buffer)를 섞고, 입구를 막은 후 전자레인지로 2분간 가열

삼각플라스트를 약 60도 식힌후, BANDI-GREEN 4ul을 넣는다. 

Agarose gel를 tray에 붓고, well comb을 끼워 20-30분간 굳힌다 

 

굳은 agarose gel을 1x TAE Buffer로 채워진 gel running tank에 위치시킨다

첫번째 well에 DNA ladder 5ul를 로딩한다

PCR sample를 순서대로 10ul씩 로딩한다

Running-100V 25-30min 

UV visualizer를 이용하여 DNA band를 관찰하고 gel 이미지를 촬영한다 

#PCR
 
#전기영동
 
#DNA
답변하기
답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  04.04 10:48  

primer band는 보이나요?

DNA prep.과 PCR 중 어느 단계에서 문제가 있는 확인해야 할 것 같습니다.

fast prep.이 아닌 정상 protocol로 DNA를 분리 후 PCR을 한번 해보세요.

알가나다라마마마  |  04.05 11:15  

쥐를 다루는 많은 연구실에서 쓰는 Dirty Prep을 이용한 Genotyping을 하시는 것으로 판단됩니다. 하시는 실험의 원리는 구글에 Mouse Tail DNA dirty prep 치시면 자세한 프로토콜과 설명이 있을 겁니다.

 

다른 사람들 다 되는데 본인만 안되시는 거라면

 

1. 다른 사람들과 본인이 사용하는 Primer가 같나요? Dirty Prep로 DNA를 뽑을 경우, Primer 에 따라 PCR이 잘 안되는 경우가 있습니다.

 

2. 끓인 후 Buffer 2를 넣고선 둘을 voltexing 하셨나요? voltexing 후 centrifuge를 해야 바닥으로 남은 tissue를 비롯한 dirty debris를 잘 내릴 수 있습니다.

 

3. PCR을 할 때 쓰는 상층액이 끈적임이 심한가요? 2번에 이어지는 내용으로, 끈적임이 심한건 Buffer 2를 넣고 정상적으로 DNA가 분리가 잘 되지 않을 때입니다.

 

4. PCR 할때 total 18ul인데, premixture가 10ul 인거는 제품회사가 요구하는 사항과 같나요? 보통 genotyping 할 때 쓰는 PCR premixture는 2x 혹은 5x 로 농축된 애들인데, 18 중에 10은 이 둘다 아닙니다만... 

 

지금 생각나는 건 이정도네요. 실험 잘 되시길 바랍니다. 

답변하기
할인행사 광고 검색광고
인성크로마텍 인성크로마텍
Phenotype Microarray™ - High-throughput 세포 대사 & 민감도 스크리닝 분석.. (5.1까지)
필코리아테크놀로지 필코리아테크놀로지
두둥! 최대 원쁠원 행사부터 20% 행사까지! 없는거 빼고 다 있는 필코리아테크놀로지 할인행사! (4.20까지)
필코리아테크놀로지 필코리아테크놀로지
우체통 열어주세요 필코리아테크놀로지의 뉴스레터가 들어가니까요!! (4.20까지)
바이오닉스 바이오닉스
[TECAN공식대리점] 봄맞이 사은이벤트 (5.1까지)
그린메이트바이오텍 그린메이트바이오텍
[IMPLEN공식대리점] UV/Vis Spectrophotometer 구매 시 선착순 멀티 파이펫 FREE!.. (4.31까지)
그린메이트바이오텍 그린메이트바이오텍
[TECAN한국대리점 20주년] Microplate reader 초특가 이벤트!! 20년 서비스 노하우 (6.31까지)
브래디 브래디
초저온라벨 등 실험실용 라벨링 솔루션 (4.27까지)
프리미엄 등록안내
최근등록   더보기 >
MCE 필터에 아세톤 멸균여과해도 될까요?   04.16
gDNA 시퀀싱   04.16
lentivirus production 시 vector 비율이 궁금합니다.   04.16
Lentiviral vector 클로닝   04.16
SH-SY5Y cell contamination 도와주세요...   04.16
세포를 계산해서 보관하는 이유   04.16
파라핀 블럭   04.16
DMSO와 PBS   04.16
마우스 순화기간에 고지방 식이 사료를 줘도 괜찮나요?   04.16
oil red o staining 질문드려요   04.16
최근답변자 우수답변자
알가나다라마마마

알Grooot

올챙이쏭달쏭알

대왕개구리SPEED

개구리bio

알고등학생1

올챙이Mazician

개구리Arkadis

꽃개구리visavis

개구리secu

개구리Marine

개구리얕은지식

꽃개구리Applied_Mi..

꽃개구리스카이

꽃개구리발그런

개구리쿠나비

실험관련연재
박은총 연재중후배에게 주고 싶은 면역학 노트
박은총(Duke University)
신코 연재중분석장비 이야기
분석장비 탐험가 (필명) ((주)신코)
Mr.S 연재중의학계의 Spectaculum: 임상시험
Mr. S (필명) (연세대학교)
에스프리 연재중실험을 해봅시다
에스프리 (필명)
곽민준 연재중랩노트
곽민준 (POSTECH 생명과학과)
이제욱 연재중생명과학자 기초체력 다지기
이제욱 (오송첨단의료산업진흥재단, 신약개발지원센터)
위로가기
실험 홈  |  실험FAQ  |  실험 문의 및 제안
 |  BRIC소개  |  이용안내  |  이용약관  |  개인정보처리방침  |  이메일무단수집거부
Copyright © BRIC. All rights reserved.  |  문의 member@ibric.org
트위터 트위터    페이스북 페이스북   유튜브 유튜브    RSS서비스 RSS
진스크립트 광고