실험 Q&A Chemical biology > Analysis
PCR 실험에서 DNA Band 자체가 나오지 않네요
레벨1 김개불 (대학생)
실험실습을 하면서 쥐 DNA를 이용해서 PCR를 했는데 전기영동후에 DNA Band가 아예 보이지 않는데 그 원인을 모르겠네요.
같은 방식으로 진행한 다른 사람들은 결과가 다 나왔습니다. 실험의 사용된 용액에는 문제가 없는데 만약 DNA밴드가 보이지 않는다면 어떤 점에서 잘못된 것일까요? 혹시 어떠한 용액을 많이 넣거나 적게넣으면 DNA 밴드가 아예 보이지 않을까요?
실험과정은
준비한 쥐 tail을
Hot solution 75ul
100도에서 45분간 가열
Ice에 식힘
cold solution 75ul
centrifuge 4000rpm, 3min
PCR
PCR MIXTURE :prime Taq premix 10ul
3'D.W: 6ul
primer MIX; 2ul
PCR tubedp PCR mixture를 18ul씩 넣는다
DNA extracted from tailf를 추가한다
PCR실행한다
2.8%의 agarose gel 준비
삼각플라스크에 1.12g(Agarose)/40ml(1xTAE Buffer)를 섞고, 입구를 막은 후 전자레인지로 2분간 가열
삼각플라스트를 약 60도 식힌후, BANDI-GREEN 4ul을 넣는다.
Agarose gel를 tray에 붓고, well comb을 끼워 20-30분간 굳힌다
굳은 agarose gel을 1x TAE Buffer로 채워진 gel running tank에 위치시킨다
첫번째 well에 DNA ladder 5ul를 로딩한다
PCR sample를 순서대로 10ul씩 로딩한다
Running-100V 25-30min
UV visualizer를 이용하여 DNA band를 관찰하고 gel 이미지를 촬영한다
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