실험 Q&A Microbiology > Bacteria
DNase test에서 hydrolysis를 관찰할수없습니다.
레벨3 당무당 (대학원생)
안녕하세요, 현재 실험실에서 분리균주를 이용하여 Protease / DNase enzyme activity test를 진행중인 석사 1년차 대학원생입니다.
식품에서 분리한 분리균주를 가지고 DNase test를 진행하고자 하는데요.
실험실에 보유중인 DNase agar에 분리균주를 배양하여 test를 진행하였습니다.
하지만 실험을 진행하며 실험 방법이 잘못된거같아.. 조언을 여쭙고자 글 남기게되었습니다.
실험 방법은 다음과 같습니다.
1. DNase agar에 분리균주를 24-48hr 배양한다.
2. agar에 균주가 자라면 1N HCl을 표면에 뿌려 변화를 관찰한다.
일반적인 실험결과)
Positive : hydrolysis가 진행되어 colony 가장자리에 clear zone 형성
Negative : 아무것도 관찰되지않음.
약 20개 균주를 agar에 배양해보았는데, 미세하게 clear zone이 형성되는 몇몇 균주빼고는 아무 반응이 일어나지않았습니다.
균주는 plate에서 키우다가 broth에 배양한 균주를 가지고 DNase agar에 loop를 이용하여 배양하였습니다.
여기서 궁금한 점은.. 아래와 같습니다.
1N HCl을 사용하지않는 방법으로는, indicator로서 agar에 toludine blue, methylene blue를 넣어줄 경우에는 hydrolysis가 일어남과 동시에 배지 색이 변한다고 논문에서 보았는데요. 혹시 이 방법을 사용하는것이 더 나을까요?
아주 단순한 실험인듯한데.. 무엇이 잘못되었는지 조금이나마 조언 듣고자 글 남깁니다. 읽어주셔서 감사합니다
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