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 전체 > Molecular Biology-DNA > Purification/Isolation
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질문 안녕하세요. mini prep 후 Plasmid DNA purity 관련해서 질문 있습니다.
뒷다리레비나스(대학원생)  | 2021.05.16 14:53

안녕하세요. 

 

어제에 이어서 오늘 mini prep을 한번 더 해봤는데 

 

농도가 잘 나온 것은 1000ng/ul가 나왔고 잘 안나온 건 160ng/ul 정도가

 

나왔습니다. 

 

그런데 260/280을 봤을 때 대부분 1.92 정도 나왔는데 이정도면 

 

transfection용으로 사용해도 괜찮을까요? 

 

보통 1.8에 가까우면 purity가 좋은 것으로 알고 있습니다. 

 

그리고 mini prep할 때 Sol3를 넣은 후에 vortexing을 해도 괜찮을까요? 

 

감사합니다. 

#mini prep
 
#DNA purity
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  2021.05.16   
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

많이나온것과 적게나온것은 실험에서 무슨 차이인가요?

같은 plasmid를 가진 균 아닌가요?

Sol.III 넣고 vortex는 안하는것이 좋습니다.

뒷다리레비나스  |  2021.05.16   

답변 감사드립니다 SPEED님 

 

plasmid가 다른 균주이기는 했는데 농도가 잘 나온 경우에는

 

Sol3를 넣고 10분 centrifuge 후에 상층액을 확인했을 때, pellet은 적고

 

상층액의 양은 많았습니다. 반면 농도가 적은 plasmid는 pellet이 많고 

 

어제 글을 올렸던 것 처럼 벽에 안붙고 Sol3 처리가 잘 안된 것 같더라고요. 

(Sol3의 양도 protocl대로 하였습니다.)

 

오늘은 15ml LB(w Amp)에 접종했던 걸로 mini prep을 어제와 똑같이 진행하였습니다. 

 

대왕개구리SPEED  |  2021.05.16   

균주 보다 plasmid가 다른 종류인지 ori가 다른 종류인자가 중요합니다.

plasmid 분리실험은 워낙 간단한 실험이라서 세포 내 plasmid 자체 농도가

낮은 건지 정확히 알수 없습니다.

plasmid 농도를 비교하려면 OD값을 동일하게 실험해야 합니다.

또한 prep.중에 tube 별 동일한 현상으로 진행되는지도 중요합니다.

질문만으로는 이유를 확인하기 힘듭니다.

plasmid quality는 흡광도 측정도 하지만 전기영동으로 확인하는것 또한

다른측면에서 판단하기 좋은 방법입니다.

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