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질문 Cell counting, seeding 도와주세요 Speed님
올챙이사고치는뚝딱이(대학생)  | 2021.07.01 17:08

안녕하세요

cell counting과 cell seeding 계산에 제가 잘못생각하는게 있는지 여쭤보고자 질문을 올리게 되었습니다. 

다른분들이 설명해주신 내용과 비교했을 때 제가 뭐를 잘못생각하고 있는지 잘 모르겠습니다. 

Hemacytometer를 통해 cell counting한 cell이 170이라 가정했을 때

170/4(4well이기 때문에)*2(Cell 10ul, Trypan blue 10ul)*6(dish) = 510 

즉, 현재 cell 농도가 510*10^4ml입니다. 

4 well에 Seeding한다고 했을 때 density가 5*10^4/ cells/well

Seeding 농도는 4 well기준 5*10^4/ml일 때 

Seeding 농도/현재 cell 농도로 둘다 ml에서 ul로 변환해주면 

5*10^7/ul / 5100 cell/ul이 된다고 하는데 

1ml가 1000ul아닌가요? 

저는 둘다 ul로 바꿔주면 

5*10^7/ul / 510*10^7/ul인 것 같은데 

혹시 계산 과정이나 방법에 오류가 있는지 질문드리고 싶습니다.

#cell
 
#seeding
 
#counting
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  2021.07.01   

- 가지고 있는 cell 농도 : 5.1 x 10^6/ml, 510 x 10^4/ml

- seeding cell 농도 : 5 x 10^4/well

- well 당 넣을 cell 부피

: (5/510) x 1000 = 9.8ul

 

가지고 있는 cell 농도가 높으므로 희석해서 사용하는 것이 오차를 줄일 수 

있습니다.

올챙이사고치는뚝딱이  |  2021.07.02   

SPEED선생님 답변 정말 감사합니다. 

혹시 제가 이해한 바로는 1 well당 9.8ul의 cell과 990.2ul의 medium 넣어주면 된다고 생각하는데 

말씀하신 희석이 필요하다는 것이 제가 이해한 바가 맞는지 궁금합니다. 

 

대왕개구리SPEED  |  2021.07.02   
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

1ml를 넣을 경우 계산은 맞습니다.

그러나 9.8ul는 오차가 생길수 있는 양이기 때문에 원액을 최대한 희석한 후 

media와 혼합 후 넣는 것이 좋습니다.

피펫팅 실력이 좋아서 9.8ul에도 오차가 생기지 않으면 상관없습니다.

9.8ul를 여러개 배양해서 cell 수를 측정해 보면 오차 정도를 알수 있습니다.

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