실험 Q&A Cell Biology > Transfection
대장암 세포주 transfection 후 contamination 때문에 고민입니다.
레벨1 enthusiasm (대학원생)
저는 현재 대장암 연구실에서 통합과정 학생으로 지내고 있습니다.
실험 진행 중인 세포주로는 DLD-1, LoVo 그리고 SW480을 가지고 miRNA와 관련된 연구를 진행하고 있습니다.
몇 달 전부터 계속해서 cell line contam과 관련된 문제 때문에 고민입니다.
갑작스럽게 감염 증상을 보이다보니, 어떤 것들? bacteria인지 효모 인지 정확히 모르겠습니다...
보여지는 모습으로는 길쭉하게 생겨서 뱀처럼 꾸물꾸물 움직이거나, 작고 동그랗게 생겨서 활발히 움직이는 것들 이렇게 2 종류로 예상됩니다.
Material들은 새로 만들거나 구매한지 얼마 되지 않았고, filter tip도 사용해보고 pipette도 다른 것들을 사용하는 등 여러 가지 조건들을 계속 바꿔가면서 해결해보려 노력하였지만, 계속해서 contam되고 있습니다.
Transfection에 주로 사용하는 material 들로는 Gibco의 RPMI, FBS, penicillin/streptomycin 그리고 Opti-MEM과 Lipofectamin RNAiMAX를 사용하고 있습니다.
특히, transfection 이후 10% FBS media (free-antibiotics)로 교체해주니 p/s가 없어서 그런지 확실히 눈에 띄게 움직이는 것들이 증가하는 것을 확인하였습니다.
동영상이 업로드 되지 않아 캡쳐하여 올립니다.
업로드하는 사진의 경우, SW480 세포주를 6well plate에 seeding 해서 몇 가지 테스트를 해보았습니다.
조건들로는,
1. 10% FBS RPMI media에서 48hr 키운 것: 적지만 움직이는 것들 보임 - SW480 세포주 자체가 먼저 오염된 것으로 판단하여야 하는 것인지...?
2. Opti-MEM에 48hr 키움: 처음보는 종류의 오염, 길쭉한 것들이 뱀처럼 꼬물꼬물 활발히 움직임
3. Lipofectamin RNAiMAX 처리 후 24hr 뒤 media change 한 것: miRNA mimic이나 siRNA KD 시킨 것들이 주로 비슷한 모습을 보임, 작고 비교적 동글동글한 것들이 활발히 움직
4. miR-NC transfection 후 24hr 뒤 media change 한 것
혹시 감염된 것들이 정확히 무엇인지, 그리고 관련된 문제를 해결할 수 있는 방법이 있는지 궁금합니다.
몇 달 동안 시달려서 실험 진행에도 많은 차질이 생기고 있어서 답답합니다.
관련해서 경험이 있으시거나 이러한 문제를 해결하신 분들의 많은 의견을 부탁드리도록 하겠습니다.
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