수용소 지용성을 모두 mounting했다는게, 무슨말인지 모르겠습니다.
Mounting medium은 그냥 이름만들어도 아는 브랜드의 제품들을 사용하면되는데, 어떤 회사 혹은 조성의 mounting medium을 사용한건가요?
DAPI staining & washing후, coverslip의 모서리 부분을 휴지에 살짝 누르면서 buffer를 제거한뒤에 바로 mouting하면 됩니다. 완전히 말리는건 권장하지 않습니다.
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레벨2
줌수
(대학원생)
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21.07.23 15:47
ki 님 답변 감사드립니다.
수용성 mounting medium으로도 해보고 비 수용성 mounting medium으로도 해 보았다는 말이었습니다. 지용성이 아니라 비 수용성인거같네요... DAIDO SANGYO CO., LTD.의 mount-quick "aqueous"와 일반적인 malinol을 가지고 실험을 해보았었습니다.
보통 수용성 mounting medium으로 사용한다고 하길래 Aqueous mounting medium으로 mounting을 여러번 해보았는데 세포 형태가 깨지는 경우도 많았고 현미경으로 녹색형광 관찰시에 background 자체가 너무 형광색으로 빛이 퍼져보여서 malinol로도 mounting을 해보았습니다. malinol로 하면 background가 그나마 어둡게 나오긴 하더라고요...
왜이렇게 빛이 퍼져서 나오는건지... 세포 형태를 안정적으로 잡아주려면 어떻게 해야하는지 등에 대한 고민이 있습니다요
제품 정보와 그리고 글쓴이 분의 실험결과를 바탕으로 보았을때, 일반적으로 하는 immunocytochemistry에는 적합하지 않은거 같내요.
알려주신 회사 제품 보니, medium이 누런색깔인데 이것때문에 autofluorescence가 있는듯 합니다. 제가 사용중인 moutaing medium은 투명합니다.
지금 있는 시약으로 개선하기보다
Thermo, Abcam, Cell Signaling Technology 등 회사의 제품으로 구매하셔서 실험하시는걸 적극 권장 드립니다.
https://www.abcam.com/fade-fluorescence-mounting-medium-aqueous-fluoroshield-ab104135.html
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레벨1
say ho
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21.07.24 15:07
mounting은 사용하라는 제품이 따로 있습니다.
염색에 사용하는 시약이 수용성인경우 수용성으로 mounting을 하면 염색한 시약이 mounting용액으로 용출되어 발색이 사라집니다. 그래서 지용성 mounting용액을 사용합니다.
염색 시약이 지용성인 경우 수용성 mounting을 하고
특수시약의 경우 그 시약에 맞는 특수 mounting용액을 사용합니다.
벡터에 넣고 GFP를 봤으면 이 경우랑 별 상관이 없긴 한데
그 과정에 어떤 시약을 사용했다면 그 시약의 설명서에 어떤 mounting용액을 사용하라고 나와있을거고 그 mounting용액을 사용하는게 좋습니다.
사용하신 제품 Mount-Quick “Aqueous”의 설명을 보니
Mount-Quick “Aqueous” mounting medium is not recommended for use in immunofluorescence procedures.
형광염색에는 사용하지 말라고 되어있습니다.
IHC의 경우 보통 샘플을 바짝 말리고 mounting을 하지만
immunofluorescence의 경우 말리지 않고 mounting을 합니다.
현미경 사용이 능숙하시다면 mounting을 하지 말고 pbs를 올리고 본 후
mounting을 하고 차이점을 확인하는것도 좋습니다.
위에분 말씀데로 Anti-Fade Fluorescence Mounting Medium 사용하시는게 좋을것 같습니다.
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레벨2
줌수
(대학원생)
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21.07.24 17:13
ki님, say ho님
친절하고 자세한 답변 너무 감사드립니다!
덕분에 실험이 잘 될것 같습니다 ㅎㅎ