binding 실험에 사용하려면 가장 좋은 것은 냉장 보관입니다.
실험을 단시간에 끝내지 못하면 차선책으로 냉동보관을 해야 하는데
이때는 buffer 보다 냉동 안정성을 교려하는 것이 중요합니다.
50% glycerol을 넣어서 -80도에서 보과하는 것이 좋고 해동시에는 ice에서
해동하는 것이 가장 좋습니다.
보관시 소량 분주하여 여러개로 나눠서 보관하면 됩니다.
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딸기히어로
(대학원생)
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21.08.04 18:37
SPEED 님 답변 감사드립니다!
한가지 더 질문이 있는데요,
PBS에 들어있는 단백질에 바로 50% glycerol을 넣어도 큰 문제는 없을까요?
감사합니다!
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딸기히어로
(대학원생)
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21.08.04 18:55
SPEED 님,
PBS 버퍼 조성은 정확하게 알지 못하고 일반적으로 실험실에서 사용하는
1X PBS 로 생각하면 될 것 같습니다 ! ㅠㅠ
효소는 phosphate buffer에는 보관해도 PBS에는 잘 보관하지 않습니다.
현재 buffer에 glycerol을 1 : 1로 혼합하면 50%가 됩니다.
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딸기히어로
(대학원생)
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21.08.04 19:27
SPEED 님,
잘 모르는 부분이기도 하고, 주변에 물어볼 곳도 없어서 답답했는데 조언해주셔서 도움이 많이 되었습니다.
한가지만 더 여쭤볼 수 있을까요?
지금 가진 효소를 desalting column 으로 buffer exchange를 하여 보관하는 것은 어떻게 생각하시는지요?
( 추후 실험 조건에서 권장하는 buffer 조성에
glycine, tris 등은 사용할 수 없어서 다시한번 buffer exchange 해야합니다)
현재 단백질 농도가 어떻게 되고 1회 실험 시 어느정도 단백질을 사용하나요?
desalting하면 어느정도 loss는 감안해야 합니다.
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딸기히어로
(대학원생)
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21.08.04 21:19
SPEED 님,
단백질 농도는 1mg/mL (42μM) 이며, 양은 60μg 입니다.
희석 후
4μM 농도의 단백질 10μL 로 한번 실험 한 후로는
1회 실험 시 200nM 의 농도로 100μL의 양을 사용할 예정입니다!
(대략 200nM ~ 4μM 의 농도로, 100μL ~ 10μL 양 을 소모할 예정입니다)
양은 충분한 것 같으니 buffer change를 한 후 glycerol을 넣고 보관해도
될 것 같습니다.
desalting column보다는 UF를 사용하는 것이 좋습니다.
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딸기히어로
(대학원생)
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21.08.04 21:36
SPEED 님,
기나긴 질문에도 답변해주신 덕에 많이 배웠습니다
날씨가 더우니 건강 조심하세요
♡( ◡‿◡ )