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BioLab 장재봉 교수
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 전체 > Immunology > Immunocytochemistry
조회 959  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 FACS Sample fixation 관련해서 궁금한 것이 있습니다.
개구리아이고야(대학원생)  | 2021.09.02 21:19
이번에 lymphocyte 와 splenocyte 에서 intracellular cytokine staining을 진행하게 되었는데요,보고자하는게 여러가지라, fixation 을 하고 여러가지를 분석해봐야할거 같아요.

fix& perm후 surface staining 과 intracellular cytokine 을 보려하는데, fix 후 4도에서 얼마나 샘플들이 괜찮을까요?

또한 프로토콜들을 보니 surface staining 을 fix 전에 하길 추천하던데, fix 하고 해도 괜찮은지 궁금합니다.
#Facs
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
개구리정점  |  2021.09.03   

Q1. fix 후 4도에서 얼마나 샘플들이 괜찮을까요? 

A: 정확히 몇일 이렇게 말씀 드리긴 어렵지만 몇일간은 괜찮을듯 합니다. 아래 링크참고 하시면 좋을듯 합니다.

https://www.stemcell.com/fridge-freeze-or-fix-cells.html

Q2. 또한 프로토콜들을 보니 surface staining 을 fix 전에 하길 추천하던데, fix 하고 해도 괜찮은지 궁금합니다

A: 보고자하는 Protein epitipe가 Fixation에 영향을 받는지에 따라 다릅니다. 

Fixation 전후 staing에 따라 Antibody performance가 상당히 다른경우도 있습니다. 경험상 샘플이 많거나 일정이 빡빡한경우 각 샘플에 소량의 fixation buffer를 넣어주고 staining을 한번에 진행하는 경우도 있습니다. Spleenocyte를 이용하신다면 아마 Fixation 후 staining 하셔도 잘 나오실듯 합니다.

antibody performance 관련 자료 필요시 메일 주소 적어주시면 보내드리도록 하겠습니다.

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