실험 Q&A Mol. Biol.-DNA > Purification/Isolation
plasmid DNA 전기영동 band가 끌리는 이유가 뭔지 궁금합니다.
레벨1 Cyl07 (대학생)
안녕하세요. plasmid DNA 전기영동에 관하여 질문이 있어 이렇게 올립니다.
전기영동을 내리면 사진과 같이 DNA ladder가 w 모양이 나오고, plasmid는 뭉쳐서 끌려내려옵니다..
Buffer는 1X TAE buffer를 사용했고 Agarose gel은 1.0%로 만들었고, 전압은 120V로 맞추었는데 저렇게 끌립니다.
well에 ladder는 dye, ladder, nfw 를 각각 1,1,8ul씩 분주한뒤 5ul만 넣었고 plasmid DNA는 dye, plasmid를 각각 1,5ul씩 분주한 뒤 6ul를 넣었습니다.
그동안 1X TAE buffer는 새로 만들어 갈아보고, 전압을 70, 80으로 낮춰보기도 했고, gel이 제대로 굳은게 아닐까 싶어 30분, 40분, 50분 간 각각 굳힌 후 실험을 진행하였습니다. 그런데 모양이 불규칙하게 나오는 이유를 모르겠습니다.
동일한 기기로 다른 사람이 실험하니 3번째 사진처럼 나오는 걸로 보아선 기기의 문제(불규칙한 전압)는 아닐 것이라고 생각하는데, 아직까지는 아마 gel을 만들거나 1X TAE buffer를 만드는 과정에서 생기는 문제+ plasmid DNA분주에서 어떤 문제가 있지않나 싶습니다.
혹시 어떤 점이 문제인지 싶어 이렇게 도움을 구합니다.
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