실험 Q&A Mol. Biol.-DNA > Purification/Isolation
스테비아 DNA 추출실험
레벨1 김천미니언 (대학원생)
제가 스테비아 DNA를 뽑고있습니다.
현재 기본적인 프로토콜은 CTAB 추출법을 사용중인데요
스테비아 잎을 액체질소로 간다음 1.5ml 튜브에 시료를 100ul까지 채운다음
CTAB 500ul 와 2-mercapto 20ul 를 넣고 30분간 65도에서 인큐베이션
이후 Chrolo : iAA (24:1)을 CTAB과 동량 넣은다음 원심불리 후
상층액을 딴다음 IPA 0.7배 첨가 후 1시간 -20도 휴지 후 원심분리 후 75%
Ethanol 세척한 다음 펠렛을 말리고 3차 멸균수 로 일루션 하고 있습니다.
문제가 되는게 펠렛이 갈색 빛을 띄는 경우가 있고 하얗거나 투명해도 멸균수로 일루션 할때 잘녹지 않습니다.
결과적으로 나노드랍 결과에서 260/230값이 0.8~1.0사이로 낮게 나오고
260/280은 1.8~2.0이 나오고 있습니다. 260/230값을 개선하고 싶어서 현재 버퍼양도 조정해 보고 PVP40도 사용해 보았는데 결과가 좋지 않습니다 개선할 다른 방법이 있을까요?
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