실험 Q&A Immunology > Immunoprecipitation
Co-IP buffer와 lysis buffer
레벨3 신짜오 (대학원생)
안녕하세요, 공부한지 벌써 1년이 된 석사 2차 입니다!!
지금 co-IP 실험을 한지 꽤 되었지만 제대로 된 결과를 본 적이 없어 buffer에 대해 의구심이 들었습니다.
제가 현재 사용하는 IP buffer의 조성은
50mM Tris HCl pH7.4
15mM Nacl
1mM EDTA
0.1% triton x-100 입니다.
IP를 할 때는 cytoplasm fraction kit를 통해 뽑은 세포질 protien을 사용했습니다. 그러나 브릭에 검색해보니 'fraction으로 뽑은 단백질은 salt를 맞춰야한다', 'SDS는 들어가면 안된다' 등 있었습니다. 그래서 lysis buffer와 IP buffer에 대해 궁금점이 생겼습니다.
1. 제가 사용하는 IP buffer의 조성은 괜찮은가요?
2. 검색해보니 "lysis buffer=IP buffer"로 둘의 의미가 같은것 같은데 protein 뽑을 때 쓰는 RIPA buffer로 IP를 하시나요?? 혹은 IP buffer로 lysis를 하시나요??
3. 만약 위의 대답이 모두 yes라면 제 IP buffer로 protein을 뽑아도 되나요??
지난 1년동안 선배님들 답변 덕분에 많은 것을 배웠습니다. 항상 감사합니다! 조금 늦었지만 새해 복 많이 받으세요:)!!
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