보통 step gradient elution을 하는 이유는 impurity가 없는 fraction을 얻기 위함입니다. Gradient elution을 하시고 이를 pooling하셨다면 gradient의 의미가 없습니다.

Dialysis는 imidazole의 농도에 영향을 받기는 하지만 단백질의 고유특성에 의해 결정되는 경우가 많습니다. 너무 급격한 농도차이를 주시지는 말고 1/2 씩 줄여가면서 dialysis를 해보세요. 그이유는 급격한 buffer 변화는 단백질 침전의 가장 큰 원인입니다.

다시 nichel resin에 붙이시려면 dialysis를 하시건 아니면 imidazole이 없는 buffer로 희석을 하시건 binding buffer이하로 imidazole의 농도를 줄이셔야 합니다.