혹시 저와 같은 문제를 마주치는 분이 있을까봐 해결방법을 댓글로 남깁니다~
질문의 실험 protocol은 H2O2와 약물 모두 처리 해 놓고 마지막에 DCFDA 를 넣었습니다.
여러 방법으로 시도해보면서 문제가 해결된 protocol을 말씀드리자면,
세포에 DCFDA를 먼저 넣어놓고 약물과 H2O2를 넣어 incubation 시킨 다음 형광을 찍으면 해결이 되었습니다.
DCFDA를 먼저 넣어놓고 실험을 하는 것이 핵심이었던것 같습니다.
DCFDA 시약 제조사의 protocol에 따라 먼저 넣는 것도 있고 맨 마지막 스텝에 넣는것도 있는데 plate reader로 읽어내야 하는 저의 경우에는 전자에서 농도에 비례하게 아주 잘 나오는 것으로 확인되었습니다. live 상태에서 bottom reading이 아닌 top reading으로도 결과가 잘 얻어졌습니다.
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실전 실험 프로토콜 101
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