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1. 네 DNA marker 맞습니다<br />
1-1. gel의 문제이거나 아직 덜내린듯한데 제 생각에는 gel이나 영동시에 문제가 있어보입니다-다른 고수분들의 의견도 참고해주세요
2. 각 lane별로는 당연히 다른 sample을 loading합니다 sample끼리 섞어서 로딩하지는 않겠죠?<br />
3,7,11이 다르게 나온건 실험상에 문제가 있거나 결과가 다르게 도출된거라고 생각해야됩니다 그부분은 실험의 진행사항을 아는 질문자님이 생각해보셔야될 문제라고 생각해요
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레벨1
jhongno1
(대학생)
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22.05.16 09:56
답변해주셔서 감사합니다.
답변해주신대로 2번 질문 같은 경우는 같은 수업에서 실험과정을 아는 다른 사람에게 물어보는 방법밖에는 없겠군요..
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지나가던 회사원
(비회원)
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22.05.16 10:17
다른분이 설명을 잘해주셨지만 첨언 할게 좀 있네요
1. 양쪽 끝은 maker입니다.
전기영동이 중간에서 멈춤듯합니다.
대게 일찍꺼냈거나, gel농도가 높았거나, 전류가 약했거나 하는 문제가 있어보입니다.
2. 목적에 따라서 다르지만 샘플간의 비교를 위해서 진행하는 경우가 많아 well별로 다른 샘플을 넣습니다. 제일 하단에는 house keeping gene인것 같고, 3,7,11에서는 무언가 다른게 발현되었네요. 11번은 좀 더럽게 나와서 정확하지 않습니다.
어려운 실험도 아니고 EtBr이 위험하긴해도 다른 학생들에게도 기회를 줬으면 하는 아쉬움이 있습니다.
100bp marker를 사용한 경우 각 band는 100bp의 차이를 보이기 때문에 정상 범주입니다.
진한 밴드가 500bp 정도이고 제일 윗 밴드는 아마도 1500bp 정도일겁니다.
400bp 정도의 밴드를 확인하려는 실험인 것 같네요.
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레벨1
jhongno1
(대학생)
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22.05.18 14:09
답변해주신 분들 모두 감사드립니다..!
1. 사진상에서 1번과 12번 레인(양 끝)은 둘다 DNA ladder(size marker) 인가요?
네, 그렇습니다.
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1-1. 인터넷상에서 본 사진들과는 다르게 marker가 다 펼쳐지진 않은거 같은데 제대로 된게 맞나요?
사진을 직각으로 찍지 않고, 기울어져서 찍었어요. 그냥 손으로 들고 찍은 듯. 어찌되었든 마커는 다 펼쳐지지 않은 이유가, 영동을 계획보다 일찍 끝낸듯요(성질이 급함)
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2. 원래 DNA 전기영동 실험을 진행할때는 각 레인마다 다른 sample을 넣는건가요? (다른 DNA sample을 넣는다는 말은 못들었는데 3,7,11번 레인은 다른것과 다르게 밴드가 정확히 두개로 보여서 질문드립니
그런 법칙은 없어요. 연습하고 싶으면 각 레인바다 똑 같이 넣고 해도 돼요. 젤에다 전기영동을 하는 이유는,
- 있고 없음을 직관적으로 확인 가능 (DNA expression)
- molecular size가 예상/계획한 곳에 specificity를 가지고 나오느냐 아니냐 결정
- 강도가 얼마나 세냐 적냐 (이것은 ImageJ로 quantification할 경우) 알 수 있음.
- agarose "DNA" gel: mutation을 확인할 수 있다. (a point mutation or missense mutation의 경우, WT, heterozygote, homozygote mutant의 molecular band pattern 이 다를 수 있어서 genotyping을 정확히 하는데에도 사용할 수 있다. 등.