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레벨5
Coolzinc
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22.05.16 21:50
https://www.youtube.com/watch?v=uILw9KQ0YBA
이론적인 부분은 이전에 브릭에서 소개된 영상 링크로 대신합니다.
그리고 detail한 protocol은
1. cell을 Trizole 혹은 RNA extraction kit을 이용하여 RNA를 뽑는다.
(사용하는 시약의 제조사 프로토콜 참조)
2. RNA 농도를 측정 후 reverse transcriptase or RT-kit을 이용하여 cDNA를 합
성한다.(사용하는 시약의 제조사 프로토콜 참조)
3. 사용하는 RT-PCR 기기에 맞는 taq. polymerase(보통 SYBR green or
TaqMan 제품) 를 제조사 프로토콜에 맞게 세팅하고 annealing temp.은
TNF-a, IL-6 primer에 맞는 온도로 설정하여 PCR을 진행함.
4. Internal control로 b-actin, GAPDH 등을 이용하여 TNF-a, IL-6의 발현량을
비교함.
중간중간 실험에 필요한 디테일한 사항들이 있지만 길어질 것 같아 이만 줄이겠습니다. 유튜브나 구글링으로 충분히 protocol은 찾으실 수 있어요
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레벨1
파이펫도둑
(대학생)
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22.05.21 23:33
TaqMan 이랑 SYBR Green 중 유전자 발현량이 더 높은게 TaqMan 맞을까요?
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레벨5
Coolzinc
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22.05.30 11:41
답변이 늦었네요..
SYBR green과 Taqman 중 유전자 발현량이 더 높다??
: 무슨 뜻인지 정확히 파악하긴 힘들지만 아마도 민감도가 더 좋다는 의미로 해석해본다면
제 경험상 Taqman이 민감도가 더 좋았고 일반적으로 특이성이 더 높습니다.
(target specific한 probe를 사용하는 구조라서...)
이러한 이유로 가격도 보통 Taqman이 비싸죠..