실험Q&A를 통해 여러분의 지식을 나누어 주세요. 답변을 등록하시려면 로그인 해주세요.
본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
1-1. 항생제가 있고 없는 상태에서 키워보면 알게 됩니다. 내가 원하는 대장균에 항생제 내성 유전자가 있기 때문에 다른 애들은 죽거나 자라지 못하고 내가 원하는 대장균만 선택적으로 배양이 가능합니다.
1-2. 흔하게 사용되는 ampicilin이라는 항생제 working 농도가 100ug/ml 인데 stock으로 100mg/ml로 보관을 하기 때문에 1000:1로 dilution하여 사용합니다. 보통 항생제들을 1000배 희석하여 사용하도록 만들어서 보관합니다. 항생제를 많이 넣으면 항생제 내성 유전자가 있는 대장균도 잘 자라지 못합니다. working 농도는 과거의 과학자들이 항생제 넣고 이리저리 배양해보고 대략 최적의 농도를 정해놓은거니 왜 그거인지 증명하고 싶다면 직접 항생제 농도별 배양해보시면 되겠습니다.
2. 대장균도 숨을 쉬어야 하는데 가만히 냅두면 가라앉아서 다른 대장균때문에 숨을 못 쉬는 애들이 생깁니다. 잘 섞어줘야 모두 평등하게 숨을 잘 쉴 수 있습니다. (이건 그냥 고등학생에 맞게 비유한거고 gas exchange 및 항생제 농도 gradient 변화를 막기 위함 등의 이유가 있습니다.) 200rpm인 이유도 초기 연구자들이 만들어놓은 프로토콜이기 때문이겠지만, 개인적으로는 과거 실험 기자재가 200rpm이 최대치였기 때문이 아닐까 생각해봅니다. (실제 rotator가 도는 지름에 따라 rpm에 변화를 주기도 하고, 250rpm 이상의 조건을 사용하기도 합니다만 이건 그냥 넘어가셔도 되겠습니다.)
3. 이건 안 해봐서 답을 못 드리겠네요.
- 액체 배지에 항생제를 주입하는 이유와 1000:1 비율의 이유,
: 반드시 1:1000은 아니고 보관농도와 사용농도의 차이가 1000배의 경우
배지에 1/1000을 넣는 것이고 보관농도가 500배의 경우 배지에 1/500을
넣습니다.
- 배양기에 넣고 200rpm으로 회전시켜 주는 이유,
: 대부분의 호기성, 통성 혐기성 미생물은 진탕 배양을 해야 잘 자랍니다.
- 굳이 배양하지 않고 실험 재료 판매 사이트(생물나라)에서 구매한 대장균을
추출에 직접 이용해도 되는지가 궁금합니다. 답변해주시면 감사하겠습니다
: plasmid가 있는 미생물을 판매하는 경우 사용 가능하지만 plasmid 농도가
낮을 겁니다.
- 구매한 미생물을 항생제 배지에 한번 더 배양해서 추출 하는 것이
정상적으로 plasmid 추출이 가능 할 겁니다.