실험 Q&A Cell Biology > Cell Cycle
cell cycle analysis 고수님들 계실까요? ㅠ
레벨1 hessed (과기인)
안녕하세요.
현재 진행 중인 cell cycle analysis로 애를 먹고 있어서 처음으로... bric에 질문을 올리게 되었습니다. 혹시 아시는 분 또는 이와 비슷한 경험이 있으신 분 있으시다면 공유해주시면 큰 도움이 될 것 같습니다.ㅠ
[1] 저의 실험 조건은 다음과 같습니다.
1. human primary cell로 실험 중 (human biopsy를 가지고 해서요ㅠ).
2. FACS sorting 후 cell 수가 얼마 나오지 않기 때문에 5k의 cell을 가지고 histogram (G1,S,G2 %)을 얻으려고 합니다.
3. PI staining을 하고 있으며, 70% ethanol을 fixative로 사용 중입니다.
[2] 어려움
1. 10k로는 어느정도... 성공을 했는데 (이것은 cell line으로 성공한 것입니다.).. 5k는 예쁜 histogram이 나오지 않네요.. FACS에서 읽히는 cell수도 너무 적구요.. 한 300-400 정도입니다.. 쉽지 않네요 ㅠㅠ
[3] 아래의 질문에 어떻게 생각하시나요? ㅠ
1. 저는 70% ethanol fixation하고 나면 cell이 buoyant해지기 때문에 cell loss가 많아서 그런가해서.. fixation방법을 바꿔야하는지 생각 중입니다.
2. ethanol fixation하고 cell down, suction 후, 뒤져본 대부분의 protocol에서는 pbs로 2번 washing 이 있는데... pbs washing을 skip하고 바로 PI (in PBS) staining soln.을 치면 cell loss를 줄일 수 있지 않을까... 생각 중입니다..
3. reference 찾아보니.. 물론 거의 cell line으로 해서 그런것이겠지만 1000k 정도 되는 cell로 하던데... primary로 저렇게 적은 수로 cell line은 하는게 당최.. 가능한 것인지.. 몰겠습니다. ㅠ
답변 감사드립니다.
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