실험Q&A를 통해 여러분의 지식을 나누어 주세요. 답변을 등록하시려면 로그인 해주세요.
본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
virus stock 농도는 어떻게 측정하신건가요? 293FT cell을 counting 하셨나요?
-
레벨2
slide
(대학원생)
-
22.06.17 10:28
스탁 농도는 저희가 받아서 사용했구 셀은 부착해서 자라는 다른 셀입니다!
전통적인 방법은 colony를 세는 것입니다.
cell counting하는 MOI 측정법을 쓰신건가요?
-
레벨2
slide
(대학원생)
-
22.06.17 19:03
설명을 더 하자면 셀카운팅했을 때 2.25*10^6 cells/ml이었고 총 8ml에 suspension하였으므로 18*10^6cells/8ml이 있다고 생각했습니다.
5moi면 90*10^6 virus를 넣어주면 되므로
2*10^9 virus/ml에서 9*10^7으로 희석하여
총 45람다를 따면 9*10^7이므로
45람다를 따서 20ml에 희석하여 150파이에 20ml 다 넣어주고 진행을 하였는데요.
저는 항상 cells/ml로 단위를 맞추고 계산을 하다보니 이 과정이 이해가 안되어서요ㅠㅠ
cells/ml로 단위를 맞추고 계산을 해도 20ml에는 45람다가 나와야되는거아닌가요..?
가령
Dish에 seeding한 cell의 total cell number 가 18 x 10^6 cells 이라면
5MOI에 해당하는 virus 는 90 x10^6 virus
virus stock이 2 x 10^9 virus/mL
따라서 virus stock에서 45 uL를 취해 dish에 넣으면 되겠네요.
이때 dish는 virus 넣기 1일 전에 미리 cell을 seeding 해놓은 상태여야 하구요..
virus 넣을때 dish에 media volume은 dish 크기에 맞게 조절하면 되겠네요.