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 전체 > Molecular Biology-DNA > PCR/RT-PCR/Q-PCR
조회 268  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 real time PCR 관련 문의 드립니다.
알물밥장(대학원생)  | 07.05 12:27

현재 reference gene으로는 B-actin을 10pmol 농도로 사용하고 있으며, target gene 또한 10pmol농도로 사용하고 있습니다.

 

cDNA합성 후 ct값에서 B-actin은 26~27이 나오고 target gene은 29-30이 나옵니다.

 

cDNA를 20, 40, 60, 80 ,100배 희석해서 사용한 sample 모두 ct 값이 29-30이 나오는데 희석배수를 5배 정도로 줄이는게 맞는걸까요

#qPCR
 
#CT값
 
#희석
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
개구리범수리  |  07.05 17:44  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

reference gene의 경우 Ct값이 그래도 15~18정도는 보통 나와야 하는데... 너무 높은데요? 

cDNA합성 하실때 mRNA를 몇을 넣으셨는지는 모르겠지만, 아마 20ul 합성 하실때 500ng정도를 넣으셨다면 다음에 하실때 1000ng넣고 희석 안하고도 한번 돌려보시는게 좋을거 같아요.

알물밥장  |  07.07 16:53  

네 감사합니다!

 

cDNA를 희석하지 않는 원물로 한번 분석해봐야겠네요!

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