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 전체 > Molecular Biology-Protein > Expression/Purification
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질문 urea buffer에 있는 protein 보관 어떻게 하나요?
알부레옥잠(대학원생)  | 07.07 18:05

안녕하세요 

사수도 없는 랩에서 고군분투 중인 대학원생입니다...

 

지금 항체 제작을 위한 his tag이 달린 fusion protein을 e.coli expression 시켜서 extraction 및 purification 진행 중입니다..

하지만 사수도 없고 해서 제가 혼자 찾아가며 하다가 모르겠는 부분이 있어 질문 합니다..

먼저 현재  insoluble로 expression 되는 것은 sds-page 진행하여 확인한 후 urea buffer로 lysis하여 extraction 하려고 합니다.

원래는 잠시 4°c 에 두었다가 sds-page 후 dialysis 진행하려고 했으나 그러지 못하게 되어 4일 정도 두어야 할 것 같습니다.

이때 urea buffer에 있는 protein은 어떻게 보관하는 것이 좋을까요?

그리고 혹시 dialysis protocol을 알려 주실 수 있을까요..?

찾아보니 desalting tube나 dialysis membrane등을 이용하는 것 같은데 현재 저희 lab에 그런 것들이 없는데다 어차피 한번에 성공하지 못할 것이라고 생각해서 빨리 한번 실험 해보려는 중이라 어떻게 dialysis를 하면 좋을 지 고민 중입니다.

혹시 이런 경우 아시는 protocol이 있으시면 알려주시면 감사하겠습니다..

#protein
 
#purification
 
#dialysis
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
꽃개구리bio  |  07.08 06:00  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

보통 정제 후 바로 dialysis를 해 줍니다.

가장 손 쉬운 방법은 dialysis membrane을 이용해서 elusion은 membrane 안에 넣고 1L pbs 통에 넣고 1-2 시간 마다 pbs를 새것으로 갈아주면서 dialysis하는 방법입니다. 

https://www.fishersci.com/shop/products/spectrum-spectra-por-1-rc-dialysis-membrane-tubing-6000-8000-dalton-mwco-5/086703?ef_id=CjwKCAjwiJqWBhBdEiwAtESPaLj_6yk11gVzJjisl3uh6COJtJwZjWHy6v-hK3b0gK-zmqRYouRxfBoCIo4QAvD_BwE:G:s&ppc_id=PLA_goog_2086145683_78015533683_086703__383590685738_2078744514697017158&ev_chn=shop&s_kwcid=AL!4428!3!383590685738!!!g!819094055745!086703&gclid=CjwKCAjwiJqWBhBdEiwAtESPaLj_6yk11gVzJjisl3uh6COJtJwZjWHy6v-hK3b0gK-zmqRYouRxfBoCIo4QAvD_BwE

문제는 insoluble의 경우 이 과정에서 inclusion body로 가는 경우도 많아서 결국은 soluble한 형태의 단백질을 얻기가 쉽지 않다는 것이죠..

단백질은 정말 케바케여서 일단 한번 시도는 해봐야 알 수 있습니다.

대왕개구리SPEED  |  07.08 08:51  

- insoluble protein을 soluble하게 만드는 것은 이론적으로 쉽게 설명되어

있지만 거의 잘 안된다고 봐야 합니다.

 

- 조금이라도 soluble fraction이 발현이 된다면 이것을 정제하는 것이

좋습니다.

 

- 또한 insoluble을 정제하면서 고생하는 것 보다 soluble을 만드는 조건을

다시 찾는 것이 향후 실험에 도움이 될 수도 있습니다.

 

- 항체를 만드는 용도라면 SDS-PAGE gel을 잘라서 Ag로 사용해도 됩니다.

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