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 전체 > Molecular Biology-DNA > Purification/Isolation
조회 474  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 RNA->cDNA->qPCR
알77_(대학생)  | 07.07 19:34

실험 설계 과정에서 질문드립니다.

제가 RNA extraction, cDNA synthesis, qPCR을 같은 날에 모두 진행하려고 하는데요.

저는 -20도씨 보관 중이던 cDNA로 PCR해본 적 밖에 없어서..

cDNA 합성 후 바로 qPCR을 진행해도 되나요?

cDNA 합성 직후는 cDNA의 온도가 어느 정도 올라가있는 상태일텐데 이때 냉동보관 중이던 primer를 바로 첨가해줘도 되나요?

#실험 설계
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
꽃개구리bio  |  07.08 05:39  

큰 문제 없습니다.

전 보통 cDNA 합성 하고 바로 qPCR돌립니다. 

cDNA 합성 마지막 스텝에서 4oC로 해서 온도 낮추어 주셔도 됩니다. 

 

개구리영빙구  |  07.08 09:02  

왠만한 실험에서는 material만들고 난뒤 바로 하는게 좋기는 합니다

다만 cDNA의 경우에는 이것도 결국은 DNA라서 매우 안정합니다 그래서 좀있다가 실험에 사용하셔도 됩니다
저의 경우에는 몇일정도 두고난 뒤에 진행했음에도 문제없음을 확인하긴 했었습니다
(저의 경험이니까 편히 말씀드리는거지 몇일내버려둬도 100%문제 없다는 의미는 아니니 그래도 최대한 빠른 시일내에 진행하세요!)

개구리:D  |  07.08 10:43  

cDNA 합성 후에 아이스나 냉장에 보관하시면서 qPCR prime 제작하고 seeding 후에 cDNA 넣으시면 되요

개구리캐틀  |  07.12 12:30  

상관은 없지요....

요즘 cDNA합성과 qPCR까지 한번에 해주는 premix제품들도 잘 나와 있어요.

TaqMan Probe법이라면  cDNA부터 qPCR까지 한버에 premix사용하는것도 생각해보세요. 

올챙이minhee  |  07.13 10:29  

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