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웹진 Vol.24, No.8 (2022년 8월) 발간
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 전체 > Molecular Biology-Protein > Western Blot Analysis
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질문 westernblot 결과가 계속 달라집니다
올챙이AGCT(대학원생)  | 08.02 23:31

웨스턴블롯을 하는데 베타액틴은 비슷하게 나와도 나머지 단백질들이 할때마다 양상이 조금씩 다르게 나옵니다. 이런경우는 해결할 방법이 있을까요?

#westernblot
 
#transfer
 
#베타액틴
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  08.02 23:38  
양상이 다르다는 것이 어떤 현상인가요?
올챙이AGCT  |  08.03 00:12  

drug를 농도별로 처리한 군의 밴드 세기가 control보다 낮아야 하는데, 같은 샘플로 해도 control보다 높을 떄도 있고, drug의 효과도 농도의존적이지 않는 경우입니다. 액틴은 고르게 나와도 저렇게 됩니다.

대왕개구리SPEED  |  08.03 00:19  
drug은 알려진 물질인가요?

액틴이 일정하게 나온다면 세포 문제 가능성이 높습니다.
앞다리experiment  |  08.05 11:52  

세포를 사용하여 lysis하신걸까요? 맞다면 아마 cell seeding부터 lysis과정사이에 문제가 있었을 것 같아요.

seeding을 늘 동일한 양으로 잘 깔렸는지 확인해보시구요(현미경관찰+cell counting 더 꼼꼼히), 웬만하면 cell도 passage가 크게 차이 나지 않는 범위에서 cell lysate만들어보세요. 그리구 lysis할때 buffer에 접촉 이후 pipetting, vortexing이나 sonication, centrifugation하는 과정에서 sample별로 시간적인 간격이 크진 않았는지 체크해보세여. 어떤군은 5분걸렸고 어떤군은 10분걸렸고 이런식으로 차이있었다거나 voltexing을 어떤군은 10초하고 어떤군은 20초하고 이런식으로 차이가 있었다거나 하는 부분들이요!

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