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BioLab 이은열 교수
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질문 CRISPR/Cas12a 반응을 위한 시약 조성비에 관한 질문입니다.
알자가격리(대학원생)  | 08.09 14:52
첨부파일 파일첨부: 112233.png (31 KB)
이미지 첨부파일

한 논문에서 본 실험의 시약 조성비입니다

 

해당 논문에선 200nM Lba Cas12a, 1uM crRNA, NEBuffer 2.5 ul, 20U RRI, RPA product9(dsDNA) 2ul, 800 nM fluorophore quencher labeled ssDNA probe로 reaction volume은 25 ul 이라고 하였습니다. 

 

실험 초보여서 이렇게 쓰여있어 어떻게 넣어야 할 지 의문입니다.

 

동일한 Lba Cas12a을 찾아보니 stock의 concentration이 1uM인데 그렇다면 Lba Cas12a를 5ul 넣어 200nM 을 넣으면 되는 것 인가요? total volume은 25 ul 이기에 1/5인 5ul를 넣어서요. 

 

RRI의 양과 논문과 같은 Probe를 사용한다면 고정적인 수치일것이고 

그렇다면 만약 다른 crRNA를 사용하고자 한다면 그 crRNA의 농도에 따라 reaction volume 도 달라지는 것 아닌가요? 

 

사진은 논문 원문입니다. 

 

감사합니다. 

#CRISPR
 
#Cas12a
 
#Volume
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