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- gel 문제로는 보이지 않습니다.
- GAPDH band를 보면 전기영동 속도가 빠릅니다.
- 항체는 O/N으로 붙였나요?
셈플희석해서 5 ul 전후로 loading해보세요
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레벨1
헤우니
(대학원생)
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22.08.22 14:38
1차는 over night 했구요 2차는 1h했습니다 tbst washing은 10분씩 3회 했습니다
전기영동은 80v 2h했습니다...샘플 문제일까요
- 80V, 2hr은 문제가 없어 보이며 sample 조성에 salt가 많이들어 있나요?
- blocking은 어떻게 했나요?
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레벨1
헤우니
(대학원생)
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22.08.22 15:03
sample 조성은 cell 깬 lysis buffer(포닥분이 만드셔서 조성을 몰라요.) d.w,
5x sample buffer (100ml기준)
0.25 Tris pH6.8 50ml / 10% sds 10ml/ 30% glycerol 30ml / DW up to 100ml
1ml씩 e tube에 나눠서 0.2M b-mecapto EtHO 35ul/1ml 넣고 -20 보관합니다.
사용시에는 녹인 후 사용하고 4도 보관합니다.
blocking은 5% skim milk 에 1h 했습니다.
- blocking은 shaking을 하면 되고 sample은 heating 후 원심분리 후 sup.만
사용하면 좋습니다.
- 전체적으로 큰 문제가 안보이기 때문에 다시 해보면 정상적으로 나올것으로
보입니다.
- loading양은 너무 많이 하는 것이 좋지 않으며 현재양으로 충분할 것으로
보입니다.
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레벨1
헤우니
(대학원생)
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22.08.22 15:59
넵ㅠㅠㅠ감사합니다